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Margi Sirois, EdD, MS, RVT, CVT, LAT, VTES,Ashworth College,Norcross, Georgia
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本文翻译至Laboratory Procedures for Veterinary Technicians Seventh Edition
01
兽医技术人员获得全血样本的方法是:将血液抽到适当容器中,加入适当抗凝剂,以防止血液凝固。一旦血液被收集起来,血液和抗凝剂可通过轻微摇动混合在一起。剧烈晃动样本会导致溶血可干扰检测结果,正常存在于红细胞的化学物质会进入血浆。
02
血浆是全血的液体部分。它由大约90%的水和10%的溶解成分组成,如蛋白质、碳水化合物、维生素、激素、酶、脂类、盐、废物、抗体和其他离子和分子。血清是除去纤维蛋白原(一种血浆蛋白)的血浆。在凝血过程中,血浆中的可溶性纤维蛋白原转化为不溶性的纤维蛋白凝块基质(图7.3)。当血凝块形成时,细胞凝块周围被挤压出来的液体就是血清。
图7.3血浆与血清的差异。血浆是剔除细胞的全血;血清是不含细胞和凝血成分的全血。
03
血液学检测主要使用全血样本。凝血检测全血和血浆都要使用。当需要全血或血浆样本时,需要抗凝剂。抗凝剂是可以阻止或延迟血样凝结(凝固)的化学物质。具体抗凝剂的选择取决于所需要的检测方法。一些抗凝剂可能会影响检测结果,因此应该根据检测程序来选择合适的抗凝剂。有些抗凝剂会干扰某些凝血试验。无论选择何种抗凝剂,在使用前,样本和抗凝剂必须通过温柔倒置达到充分混合。采样1小时内未检测的样本应冷藏。在分析之前,冷藏的样本必须回到室温,温柔倒置使其重新混合。全血不能冷冻,因为在冷冻和解冻过程中血细胞会溶解。表7.2总结了常用的抗凝药物。
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名称 |
作用 方式 |
优点 |
缺点 |
用途 |
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肝素 |
抗凝 血酶 |
可逆,无毒性 |
可凝结白细胞昂贵 |
红细胞 定性分析 |
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乙二胺四乙酸钾/钠 |
钙螯 合物 |
保存性最佳 |
使细胞收缩 |
血液学检测 |
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草酸盐钾/钠/锂 |
钙螯 合物 |
短期 效果 |
效果不稳定 |
凝血功能 |
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柠檬酸钠/锂 |
钙螯 合物 |
可逆 无毒性 |
干扰生化检测 |
凝血 功能 输血 |
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氟化物氟化钠 |
钙螯 合物 |
可抑制细胞代谢 |
干扰酶的检测 |
保护 血糖 |
肝素钠是适用于大多数应用血浆样本的检测的抗凝剂,特别是生化分析。肝素抗凝剂不应用于血涂片分类分析,因为抗凝剂会干扰白细胞的染色。肝素有钠盐、钾盐、锂盐或铵盐。肝素的作用是在凝血过程中阻止凝血酶原转化为凝血酶。由于肝素可导致白细胞和血小板聚集,并干扰白细胞的正常染色模式,因此不能用于分析白细胞形态。
肝素的使用比例应为20 U/mL的血样。对于少量血样,肝素的一种便捷使用方法是,在采样之前,在注射器内壁涂上液体肝素。含有适量肝素的真空收集管有商业化产品。当需要许多肝素化样本时,这些真空管是最方便的方法。
乙二胺四乙酸(EDTA)是血液学研究中首选的抗凝剂,在采样后不久开始分析的样本中,以适当比例使用不会改变细胞形态。如果是用于生化的血浆,则不应使用EDTA。EDTA以钠盐或钾盐的形式存在,它通过与钙形成一种不溶性复合物来防止凝血,而钙是凝血所必需的物质。EDTA管有液体和粉末两种形式。液体管对样本有一定稀释作用。为了防止凝血,在采集血液中加入1 - 2mg /mL的EDTA。过量的EDTA会导致细胞收缩,并会使自动分析仪的大多数细胞计数检测失效。
草酸盐有钠盐、钾盐、铵盐或锂盐。柠檬酸盐有钠盐和锂盐两种。这些物质通过与钙形成不溶性复合物来防止凝血,而钙是凝血形成所必需的。草酸钾是最常用的草酸盐,用法为1 - 2mg /mL。柠檬酸钠也常用,特别是在输血药物中。含有适量草酸盐和柠檬酸抗凝剂的真空收集管有商业化产品。缺点是,草酸盐还可能结合金属离子,而这是酶活性所必需的。草酸钾可抑制乳酸脱氢酶和碱性磷酸酶活性。此外,由于它是一种钾盐,它不能用在要分析钾的血液样本中。柠檬酸钠同样会干扰钠的检测以及许多常用的生化测试。请注意,不同的实验室可能有不同浓度的柠檬酸盐管,这可能会影响某些凝血试验。
氟化钠被称为血糖保护剂,也具有抗凝血特性。作为抗凝剂,它的用法是6 ~ 10mg /mL血样。含有适量氟化钠的真空收集管有商业化产品。即使存在其他抗凝血剂,氟化钠也可以作为血糖保护剂添加到样本中。血糖保护剂的用法是2.5 mg/mL的血液。氟化钠可干扰血清中的许多酶的检测。
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