ELISA分析试验中,洗涤是一个至关重要的异相处理步骤,通常人们称这一步骤为洗板,完成这一步骤的设备称之为ELISA洗板机。其本质是通过连续多次的洗液置换,以稀释和移除未反应的试剂和非特异性的杂质,降低背景值从而使分析获得更高的信噪比。洗涤不充分将会产生高的背景值,而过度的洗涤有可能会洗脱掉反应孔中的抗原-抗体复合物从而降低分析灵敏度。
ELISA洗板机是如何洗板的?
1.ELISA洗板机用的洗液需要20倍稀释,配置时用新鲜无污染的蒸馏水或去离子水现配现用。洗液如果结晶应待其融解后配制。
2.垂直倒液,迅速、干脆,重复2-3次,不要手腕左右摇摆、旋转来倒液体。
3.倒液后将酶标板放在吸水纸拍干。用干净的滤纸,不要用卫生纸,因为细小粉尘或者碎屑容易吸附到孔底,导致洗板不干净,结果偏高或偏低,重复孔的数值也会相差很大。
4.每孔加300uL洗液,太多将溢出孔外污染相邻的孔。特别是每次洗板的前两遍,若高浓度孔流串到低浓度孔或空白孔,其造成的交叉污染将无法洗掉,背景增高。
5.加入洗液浸泡30s。洗板时间太短,洗涤效果不佳。延长洗板时间和增加洗板次数可以使背景更干净。
6.每次拍板不要重复在一个地方拍,特别是洗去酶的步骤;拍板不宜过轻,否则拍不干净,拍板不要太重,以至把板条给拍断。每次洗板后轻叩几下,结束时一定要扣干净。
7.不管用多道加样器、洗瓶、吸管,还是ELISA洗板机,严格按照说明书操作不要减少洗涤体积、洗涤时间和次数。
8.扣干后的酶标板立即加液,不能干板太久。
ELISA洗板机的使用代替了之前繁复的人工拍打,其操作简便、洗涤干净的特性大大减轻了检测人员的工作量,一方面在减少误差后保障了实验的重复性,增强了酶标仪的检测效率;另一方面保护了检测人员的健康。
目前ELISA洗板机不断提升技术性能,解决洗板工作中遇到的烦恼。如:注液针和吸液针分开,避免了液体污染;设计多点定位吸液功能,保证每个微孔残留量小于0.7ul;酶标板托盘底面斜面设计和储板位悬空设计,实现了酶标板各条孔数不足不必补孔的功能。另外在防堵孔、优化酶标板的震荡和浸泡功能,保证96个微孔加液准确度上也有更多技术提升。
普朗医疗ELISA洗板机——DNX-96全自动洗板机,具有96针的精密清洗头结构设计,注液针与洗液针分离设计和防溢液功能,减少交叉污染;两点定位吸液功能,每孔平均残留量≤1uL;洗头结构设计精密,注液均匀性≤±3%;进液系统采用滤网设置,避免絮状物沉淀进入液路;采用托盘设计,不足一排不需补孔,废液可沿托盘自动排放到废液瓶。