本试剂盒采用TaqMan-LAMP法，配合特异性的双标荧光探针进行非洲猪瘟病毒（ASFV）检测。试剂盒采用两重设计，靶标基因P72和猪内参β-actin基因。

• 单管两重设计，使得检测数据更可靠，避免样本误差带来的假阴性。非洲猪瘟病毒的P72基因，外加猪内参β-actin基因。
• 有效灵敏度为200个病毒/拭子，极限灵敏度为50个病毒/拭子；灵敏度为单copy水平。
• 采用特异性的双标TaqMan探针，准确性100%，无假阳性。
• 全程闭管检测，30min内完成检测；在每个检测管中含有100个病毒以上的样本，10min内即可完成检测。
• 咽拭子、鼻腔拭子和肛拭子，核酸免提取。
• 匹配便携恒温荧光检测设备，可在野外、社区、家庭、工作场所，任何环境下操作。
• 操作简便、易学、易懂，无需复杂的培训工作。

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保存：-20℃，有效期12个月。

• P72阳性标准品为DNA形式，浓度为100 copy/μl。每次阳性对照使用5μL。
• 不同批次的试剂组分，不要混用。

• 拭子样本：鼻腔拭子采集完毕后，将拭子棉签部分放入到含有0.3mL本试剂盒提供的核酸快速释放剂中，可在1.5mL EP管，或2mL病毒保存管中操作。在释放剂覆盖棉签的情况下，漩涡混合10-20s，使棉签上的病毒和猪体细胞从棉签上脱落。放置到75℃以上温度下（可用开水），加热5分钟。取5μL加热后的浸泡液即可用于后续检测。
• 血液样本：采血完毕后（不要加入抗凝剂），待血液凝固，取50μL血清到50μL核酸快速释放剂中，混合均匀。放置到75℃以上温度下（可用开水），加热5分钟。取5μL用于后续检测。
  注意：不要使用抗凝剂处理的血浆样品，血浆样品中高浓度抗凝剂会抑制检测反应。
• 纯化核酸样本：同样适用于纯化的核酸样本，取5μL核酸样品即可用于检测。
  

• 配置反应体系
  • 按下表依次加入个成分。
  • 反应体系配好后，混匀2～5s，并短暂离心。
• 设置反应程序
  恒温扩增的检测可以使用标准定量PCR仪（也可使用恒温荧光设备），荧光通道选择FAM和ROX双通道。按下表设置：

  注意：本试剂盒无需热盖加热，在使用定量PCR进行检测时，可关掉PCR仪的热盖功能，以缩短检测时间。

• 结果判读
  • 结果判读的成立条件：
  • 检测样本结果判读
  • 典型的检测结果
    

    

    阳性样本(10 copies)
    红色线为FAM信号，表明存在非洲猪瘟核酸分子

    阴性样本（5μL拭子浸泡液）
    FAM无信号，ROX有信号，表明不含非洲猪瘟核酸分子

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