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小赛本期精选文章来源于中华病理学杂志2023年第一期，本文对受损的病理蜡块是否有保存价值进行实验验证，并对高质量蜡块处理及病理档案规范化保存等做了精彩讨论！
目的 观察洪水浸泡后的蜡块对HE染色、免疫组织化学标记及分子病理检测的影响，评估受损的病理蜡块是否有保存价值及能否满足后续检测要求。
方法 清洗蜡块表面淤泥，消毒液浸泡，自然干燥后，选取不同年份、不同标本类型的蜡块，行HE染色、免疫组织化学标记及分子病理检测，与之前档案中的检测结果进行对比，观察前后检测结果的差别。
结果 HE染色镜下显示细胞胞质和胞核红蓝对比明显，着色均匀，细胞结构清晰；免疫组织化学染色显示阳性结构清晰，定位准确；分子病理检测结果与之前结果一致。
结论 病理档案资料保存中，组织前期处理及封蜡非常关键，极端情况下能最大限度保障病理组织的完整性。
病理组织蜡块不仅是病理档案的重要组成部分，而且也是科研的宝库和资源。因此，完整且安全的保存蜡块在保障医疗安全，提升病理诊断水平中具有重要意义。在2021年郑州“7·20”特大暴雨中，本院于地下室存储的部分蜡块全被洪水淹没，经抢险7 d后转移至地面，考虑到部分病例可能有再次检测及回顾性研究的需求，我们挑选了受损的部分蜡块进行修复，并行HE染色、免疫组织化学及分子病理检测，观察其是否具有保存价值及能否满足后续检测的需求。
1.蜡块消毒：由于组织蜡块在阴暗潮湿的环境中浸泡了7 d，为了预防传染病的发生，对组织蜡块进行消毒处理。整体流程：清水冲洗附着淤泥，消毒水浸泡4 h后再次清水冲洗，阴凉处晾干归档。采用微控硫酸氢钾复合盐消毒粉，购自山东华辰制药有限公司，根据说明书进行配比。
2.蜡块包埋：取不同年份（2018—2019年）、不同标本类型（包括穿刺、小活检及手术标本）及不同肿瘤类型（肺、甲状腺、结直肠肿瘤）组织蜡块100 个。部分蜡块受损变形（图1），无法在原有的切面上切片，使用徕卡组织包埋机重新包埋组织蜡块。
3.HE、免疫组织化学染色和分子病理检测：4 μm切片，采用樱花病理全自动染色封片机进行HE染色，光镜观察组织学形态。免疫组织化学采用EnVision二步法染色，所用一抗：细胞角蛋白（CK）7、Ki‑67购自河南赛诺特生物技术有限公司，根据说明书进行操作。甲醛固定石蜡包埋组织DNA/RNA提取试剂、基因突变联合检测试剂及5种突变基因检测试剂盒，购自厦门艾德生物医药科技股份有限公司，根据试剂盒说明书进行操作。
4.结果判读：由两名副高以上病理医师对HE、免疫组织化学染色结果与之前切片进行比对观察。分子病理结果与之前病理资料库中结果比对。
1.肉眼观察：修复后的石蜡切片蜡膜无重叠、空洞、龟裂或褶皱，蜡膜无明显波浪改变。
2.HE染色结果：原切片经洪水浸泡后苏木精染色稍褪色，部分修复后的手术切除标本镜下肿瘤直径有所减小，小活检标本切面相较之前有所变化，但是肿瘤细胞排列方式存在，细胞形态完整，轮廓清晰，核仁明显，背景干净，切面变化不影响细胞的观察，可以完成正常的病理诊断（图2~5）。
3. 免疫组织化学标记结果对比：本研究选取CK7、Ki‑67作为免疫组织化学标记结果对比观测指标。CK7肿瘤细胞胞膜表达阳性，Ki‑67细胞核表达阳性，与之前的切片对比，抗体染色强度、阳性定位一致（图6~11）。
4.分子病理检测结果对比：选取25份不同年份、不同组织及不同标本类型的洪水浸泡蜡块，进行分子病理检测，结果发现，24例组织蜡块分子病理检测结果与原检测结果完全一致，1份甲状腺乳头状癌组织分子病理检测结果为未检出突变，而原检测结果为BRAF外显子15突变。
图1 部分受损蜡块
图2~5 手术切除标本受损前后，HE染色结果对比（病理编号19‑01106，甲状腺乳头状癌）；图2 HE切片见癌结节 低倍放大
图3 原HE切片癌细胞核仁、核沟可见 高倍放大
图4 重新包埋后HE切片，见癌结节直径减小 低倍放大
图5 重新包埋后HE切片，癌细胞核仁、核沟可见 高倍放大
图6~11 活检小标本受损前后，HE染色及免疫组织化学结果对比（病理编号18‑02308，肺腺癌）
图6 原HE切片，见微乳头样癌组织，癌细胞核仁可见HE 高倍放大
图7 原切片细胞角蛋白（CK）7免疫组织化学染色，肿瘤细胞核膜强阳性表达 EnVision法 中倍放大
图8 原切片Ki‑67免疫组织化学染色，肿瘤细胞核仁强阳性表达 EnVision法 中倍放大
图9 重新包埋后HE切片，切面有所变化，见微乳头样癌组织，癌细胞核仁可见 HE 高倍放大
图10 重新包埋后CK7免疫组织化学染色，肿瘤细胞核膜强阳性表达 EnVision法 中倍放大图11 重新包埋后Ki‑67免疫组织化学染色，肿瘤细胞核膜强阳性表达 EnVision法 中倍放大
我院病理档案室位于地下二层，洪灾导致蜡块被淹，灾后蜡块经过清洗表面淤泥、消毒处理后按顺序归档。由于不确定处理后的蜡块是否能满足后续检测需求，以及是否有保存价值，我们挑选了2018—2020年间部分肿瘤组织的蜡块，包含手术切除大样本及穿刺/活检样本，共检测样本100例，全部做HE染色、免疫组织化学验证，其中25例加做分子病理验证。结果是其中98例的结果与之前的结果一致。不一致只有2例，1例甲状腺组织分子病理结果未检出突变，1例穿刺标本修蜡后组织脱落损坏。实验结果说明了蜡块仍具有保存价值。通过遭遇此次罕见的突发灾害，我们也总结了一些蜡块保存的经验和教训，以期为病理档案更科学化的存储提供事实依据。
首先，高质量的蜡块是实现病理档案保存价值的前提。组织标本经取材、固定、脱水、透明、浸蜡以及包埋等程序处理后，通过蜡块形式长期保存。其中任何一个环节中细节处理不好将会导致存储的蜡块质量欠佳，且随着保存时间的延长，组织内抗原会逐渐减弱或丢失。因此，规范取材、及时固定、全自动脱水是高质量蜡块的前提。如组织取材过大、过厚，都会使组织块固定、脱水欠佳，最终导致蜡块霉变、细胞变性，从而失去蜡块的保存价值。此次蜡块受损后仍然保持了细胞形态的完整性、抗原没有出现弥散，我们推测，采用融蜡的方式涂封蜡块切面是重要因素之一。有文献报道，组织切面在空气中暴露可能会促进抗原的氧化。因此在之前的日常工作中，我们在蜡块切片工作完成后，继续在热台上倒入10 mL左右的融蜡，将蜡块组织切面朝下快速蘸取一层融蜡，完成蜡块封存后再入档案柜。后期如需回顾性研究，将蜡块深切后的组织用于检测。虽然蜡块封蜡没有技术含量，但是在实际工作中，因为病理科标本量逐年的大幅度增加，封蜡必然导致病理技术人员工作量增加，并且融蜡时产生大量的烟雾对技术员健康也有一定的影响，使得封蜡技术在实际工作中多被技术人员忽略或很难实现。因此，在将来的工作中积极寻求、研发无害自动的封蜡设备，是提高蜡块保存质量的关键途径之一。
值得关注的是，病理编号为19‑02240‑1的甲状腺标本，原突变位点为BRAF 外显子15，本次检测结果未检出突变。该标本提取的DNA浓度为4.4 mg/L，可以满足检测需要，排除因DNA 浓度过低导致未检出情况，扩增试剂指示均正常，排除操作失误。已知石蜡组织分子质控中最常出现的问题是DNA 片段化，或浸蜡温度过高导致DNA 断裂。此例标本BRAF外显子15突变未检出的甲状腺标本，我们不能确定是由于洪水浸泡引起的损害还是由于组织蜡块自身导致。
随着网络及计算机扫描技术的发展，病理档案管理逐渐向信息数字化方向发展。但是，组织蜡块作为特殊的生物资料，仍需要占用物理空间进行保存，且对保存空间的环境、通风、楼层承重也都有相应的要求。由于目前国内还没有对蜡块的存储及管理有统一的质控体系及标准，也缺乏对大量无意义的冗余蜡块（如瓣膜组织、阴性淋巴结、良性增生性病变）的授权销毁流程，使得大量的组织蜡块、切片等病理档案被放置于地下室，在保存过程中会出现丢失、霉变、虫噬等方面的问题，大大降低了病理蜡块生物样本库属性价值的有效实现。因此，尽快制定出台对于无价值的切片和蜡块的废弃标准及流程十分必要，才能使得病理科降低存储成本，提升有价值的蜡块的保存质量。
总之，病理档案的规范化保存不仅是保障医疗安全、提升医疗质量、彰显医院医疗水平和发展历史的实物资料，也是生物样本库的重要组成部分，具有重要的临床和科学研究价值。我们在病理档案管理上应建立、健全一套能够有效应对突发事件的应急保障机制，尽量减少极端事件带来的重大损失。同时，重新梳理病理档案的保存流程，降低保存成本，不断加强病理档案的完整保存和规范使用，是一个值得重视的问题。
[1]史玉洁, 董阳, 翁亚菡, 等. 洪水浸泡蜡块对病理检测质量影响的观察 [J] . 中华病理学杂志, 2023, 52(1) : 61-63. DOI: 10.3760/cma.j.cn112151-20220608-00505.
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