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Oreta M.Samples,RVT,MPH,DHSc

原文发表于2013年

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粪便漂浮试验

筛选蠕虫卵与原虫包囊时，最常用的仍是粪便漂浮试验。

粪漂溶液

根据粪便样本各成分（粪便、虫卵、卵囊、杂质）的密度差异，轻于溶液的虫卵（即密度较低）会漂浮到表面。较重的物质（即高密度）会迅速下沉。

因此，浮选溶液的密度必须高于虫卵或卵囊。值得注意的是，粪漂溶液不可仅用纯自来水，因为虫卵和卵囊较重，在自来水中下沉后仍无法筛选。

临床兽医可按下表（表三）快速配制几种常用的粪漂溶液。根据病史和预期结果选择溶液（表二）。

被动粪检漂浮法

操作步骤：首先在一个小瓶中将粪便样本与粪漂溶液混合形成浆液；然后将小瓶装满至液面凸起（图五）。将盖玻片盖于凸液面上，静置10分钟，使虫卵及包囊浮至顶部（图六）。最后将盖玻片放在显微镜载玻片上，低倍镜下观察卵或幼虫迹象。

图五：凸液面

图六：粪漂试验中盖在凸液面上的玻片

粪便离心漂浮法

粪便离心漂浮法通过离心粪便杂质，使虫卵及包囊漂浮于溶液表面。根据离心机类型选择制作涂片（固定头与摆动头）。目前的离心式粪便浮选设备包括一个能够过滤粪便混合物的滤网，可以为仪器提供更干净的样本。

两种粪漂方法比较

多数已发表的研究证实，离心法是鉴定寄生虫的首选技术，是大多数寄生虫专家推荐的方法。离心能够更加迅速、有效、彻底地分离虫卵/包囊与杂质。

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呕吐物漂浮法

怀疑犬猫有寄生虫，尤其是泡翼线虫或三尖盘头线虫时，呕吐物漂浮法十分有用。推荐将此方法纳入伴侣动物的慢性呕吐病例的初步筛查方法。

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粪便沉渣检查法

沉渣检查法用于筛选密度高于常用粪漂溶液，因此不易上浮的虫卵。容易在过饱和盐溶液发生变形或破损的虫卵也可用此方法筛选。

沉渣检查法对诊断吸虫卵最为适用，因为吸虫卵密度较高，体积与重量均大于其他虫卵，疑似感染时可用此方法诊断。此外，其他一些非肠道寄生虫，如猫肺并殖吸虫（肺吸虫）也有可能将虫卵排入唾液或其他肠道体液内，因此同样应考虑显微镜检查。

粪便沉渣法步骤详解

1. 烧杯内将2g粪便与水混合（A）；混合物用纱布过滤去除杂质，过滤后液体倒入离心机专用试管内（B和C）。

图7A

图7B

图7C

2. 配平试管，1500rpm离心5分钟（D）。

图7D

3. 倒出上层液体，不要让沉渣弄混液体。

4. 从沉渣顶层（E）吸出少量物质滴在显微镜载玻片上，盖上盖玻片观察。如果沉渣过密遮挡视线，可在镜检前滴水稀释。

图7E

备注

1.怀疑存在原虫卵囊时，用鲁戈氏碘液稀释沉渣可辅助观察。

2.怀疑存在原虫滋养体，应先在显微镜下观察，再加入鲁戈氏碘液，因为碘会杀死活滋养体，消灭原本可见的活动。

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贝尔曼法

幼虫能够成功被收集，基于多数线虫缺乏抵抗重力的游泳能力。肺吸虫位于下呼吸道时，呼吸道内的幼虫会随着唾液移动到咽部，并被宿主吞咽，后随粪便排出。因此，肺吸虫病例中，粪便中仅可见幼虫，无虫卵。在多种诊断方式下（如染色和镜检），贝尔曼法凭借仅需简单仪器仍占有一席之地。

贝尔曼法步骤详解

1. 打碎粪便样本，并用纱布松散包裹。

2. 将样本放入滤茶器上，下面接上漏斗。

3. 漏斗末端连接橡胶管，并用夹子夹住。

4. 向漏斗内倒入温水，以纱布覆盖。

5. 静置样本一晚。

6. 次日，慢慢放松夹子，向载玻片上滴一滴液体。加入1滴鲁戈氏碘液将幼虫染色，盖上盖玻片，显微镜10x倍观察。

7. 或：向小试管内滴入1-2滴液体。加入1滴鲁戈氏碘液，混合后滴在载玻片上，盖上盖玻片，显微镜10x倍观察。

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粪便培养

粪便培养步骤详解

线虫幼虫

1. 将20-30g新鲜粪便放入一个玻璃瓶中。将粪便打碎，用水润湿。无需加过多水分。

2. 室温下存放7天，避免阳光直射。每天观察瓶内是否有冷凝现象。若无凝结，略微喷洒一点水，保持培养环境湿润。

3. 第7日，用小刷子或接种环收集湿润的水滴，转移到显微镜载玻片上。

球虫卵囊

1. 将20-30g新鲜粪便与60ml 2.5%重铬酸钾混合（A、B）。

图8A

图8B

2. 将混合物倒入培养皿（C），盖上盖子，并在室温下培养3至5天。每日打开盖子，轻轻搅拌内容物，使其充分接触氧气（D）。

图8C

图8D

3. 第5日，检查粪便沉渣。

4. 随后用粪便离心漂浮法处理粪便沉渣，最后显微镜下鉴别卵囊。

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粪涂片染色

由于碘染液会杀灭滋养体，应当染色前显微镜观察粪便涂片是否有活跃生物体；运动中的滋养体易于辨识，静止的生物体在染色涂片较难辨识。

粪涂片染色步骤详解

1. 将少量粪便与生理盐水在显微镜载玻片上混合，形成一个薄层。

2. 用盖玻片将其他粪便物质推开至一侧后，盖上盖玻片。

3. 显微镜下10x和40x观察玻片（勿用油镜）。未染色的滋养体处于运动状态。

4. 用鲁戈氏碘液染色（在涂片上加一滴）生物体内部结构。滴入碘液后，滋养体活动消失。

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