作为人类共有的真空采血技术,我国在真空采血管的制造与应用方面有了很大的发展。与传统的采血技术相比,许多独特的优点是显而易见的。下面针对不同的采样管作一个简单的介绍:
一、材料
真空采血管的材质:采血管多为普通玻璃管和塑料管。
普通玻璃管由于pH值较大,容易引起溶血,而拉管工艺制作的玻璃试管线性沟密布,深浅粗细无常导致细胞挂壁。
塑料真空采血管使用PET塑料,PET塑料管具有:质量轻,便于运输;管壁破损几率极小,标本在运输,离心及试验过程发生泄漏的可能性极小;使用后可直接高压灭菌或焚烧销毁等优点。好的试管管内壁在注塑时经过特殊的处理,能有效降低血细胞与管壁的粘合度,减少纤维蛋白丝的产生。
二、添加剂
添加剂包括:抗凝剂、促凝剂、缓冲剂、保护剂、内壁处理剂、管口处理剂、分离胶等。其品种、性能、浓度直接影响血样的性状和检测结果。
常用的有如下几种:
1、生化类
01.红色采血管——普通/快速血清管
普通血清管红色头盖,采血管人不含添加剂,不含抗凝剂,也叫生化管,采血管内壁均匀涂有防止挂壁的药剂,主要用于血液生化。分为普通血清管和快速血清管,标签会标明有无促凝剂,或者采用红色和橘红色来区分两者区别,促凝剂的作用是加速血液凝固。如果想快点凝血出结果,可采用促凝管。
样本类型:血清
用途:肿瘤,性腺,免疫常规,免疫全项,风湿抗体,糖尿病肾病检测,血液三项,ICA(胰岛素细胞抗体),GAD(谷氨酸脱羧酶抗体),ABAP(骨型碱磷酶),前列腺素(T-PSA-F-PSA),HBV-DNA,铁蛋白,冷凝集,降钙素原PCT,支原体抗体,胃泌素,ANCA,血巨细胞病毒抗体,人附睾上皮分泌蛋白,血清蛋白电泳,RA五项,TB-AD结核抗体。
02.橘红色采血管——草酸钠/氟化钠血糖试验管
橘红色头盖的采血管内壁涂有均匀的防止挂壁的硅油,并且内有促凝剂,可激活纤维蛋白酶,使可溶性纤维蛋白变为不可溶的纤维蛋白多聚体,进而形成稳定的纤维蛋白凝块。快速血清管可在5分钟内使采集的血液凝固,适用于急诊血清系列化试验。
样本类型:全血
用途:血清系列化试验
03.金黄色采血管——惰性分离促凝管
惰性分离胶促凝管金黄头盖,采血管内添加有惰性分离胶和促凝剂。标本离心后,惰性分离胶能够将血液中的液体成分(血清或血浆)和固体成分(红细胞,白细胞,血小板,纤维蛋白等)彻底分开并完全积聚在试管中央而形成屏障,标本在48小时内保持稳定。促凝剂可快速激活凝血机制,加速凝血过程,避免37℃水浴,缩短检验时间,适用于急诊血清生化试验。另外,分离胶与PET管有很好的亲和性,起到隔离作用。
标本类型:血清
用途:
3ml:生化项目,地高辛浓度,心肌酶,淀粉酶,甲功,甲功全项,游离甲功,总甲状腺激素测定,甲状腺抗体,甲状腺受体抗体
5ml: C反应蛋白(CRP免疫,红黄都行),高敏C反应蛋白(hs-CRP)
2、抗凝类
01.绿色采血管——肝素抗凝管
肝素抗凝管绿色头盖,采血管内添加有肝素。肝素直接具有抗凝血酶的作用,可延长标本凝血时间。适用于红细胞脆性试验,血气分析,红细胞压积试验,血沉及普能生化测定,不适于做血凝试验。过量的肝素会引起白细胞的聚集,不能用于白细胞计数。因其可使血片染色后背景呈淡蓝色,故也不适于白细胞分类。
样本类型:全血、血浆
用途:红细胞脆性试验,血气分析,红细胞压积试验,血沉及普能生化测定。
02.浅绿色采血管——血浆分离管
血浆分离管浅绿色头盖,在惰性分离胶管内加入肝素锂抗凝剂,肝素是一种含有硫酸基团的粘多糖,带有强大的负电荷,具有加强抗凝血酶3灭活丝氨酸蛋白酶的作用,从而阻止凝血酶的形成,并有阻止血小板聚集等多种抗凝作用,可达到快速分离血浆的目的,是电解质检测的最佳选择,也可用于常规血浆生化测定和ICU等急诊血浆生化检测。血浆标本可直接上机并在冷藏状态下保持48小时稳定。
样本类型:血浆
用途:TNT,环保霉素,B27,血氨,BNP(B型钠尿肽)
03.深蓝色采血管——微量元素管
含肝素钠、EDTA Na2、EDTA K2、促凝剂(塑料管,血清)和无促凝物(玻璃管,血清)添加剂。检测血标本中的钠离子时,不能使用肝素钠,以免影响检测结果。
用途:微量元素、毒理学和营养化学检验
04.紫色采血管——EDTA抗凝管
EDTA抗凝管紫色头盖,乙二胺四乙酸(EDTA,分子量292)及其盐是一种氨基多羧基酸,可以有效地螯合血液标本中钙离子,螯合钙或将钙反应位点移去将阻滞和终止内源性或外源性凝过程,从而防止血液标本凝固。适用于一般血液学检验,不适用于凝血试验及血小板功能检查,亦不适用于钙离子,钾离子,钠离子,铁离子,碱性磷酸酶,肌酸激酶和亮氨酸氨基肽酶的测定及PCR试验。
样本类型:全血、血浆
用途:
2ml:血常规,网织红细胞,糖化血红蛋白(HBAIC),TC血群,BNP(搏适)
5ml:垂体,甲状旁腺素,肾素,肾上腺功能,肾上腺皮质功能ATCH+COR,皮质醇(COR),血型+D抗原(合血)
不适用于凝血试验及血小板功能检查,亦不适用于钙离子,钾离子,钠离子,铁离子,碱性磷酸酶,肌酸激酶和亮氨酸氨基肽酶的测定和PCR试验。
05.浅蓝色采血管——枸橼酸钠采血管
枸橼酸钠凝血试验管浅蓝头盖,枸橼酸钠主要通过与执业护士网血样中钙离子螯合而起抗凝作用。适用于凝血实验,国家实验室标准化委员会(national committee for clinical laboratory standards,NCCLS)推荐的抗凝剂浓度是3.2%或3.8%(相当于0.109mol/L或0.129mol/L),抗凝剂与血液的比例为1:9。采血后请立即颠倒混匀5-8次。
标本类型:全血、血浆
用途:用于纤溶系统(凝血酶原时间,凝血酶时间,活化部分凝血酶时间,纤维蛋白原)。
06.黑色采血管——枸橼酸钠血沉试验管
枸橼酸钠血沉试验管黑色头盖,血沉试验要求的枸橼酸钠浓度是3.2%(相当于0.109mol/L),其抗凝剂与血液的体积比为1:4,当抗凝剂比例过于偏高时,血液被稀释,可使血沉加快。肝素抗凝剂可改变红细胞的电位,故不适合做红细胞沉降率的检测。
样本类型:全血
用途:血沉
07.灰色采血管——草酸钠/氟化钠血糖试验管
草酸钾/氟化钠灰色头盖,氟化钠是一种弱效抗凝剂,有良好的防止血糖降解的作用,一般常同草酸钾或乙碘酸钠合并使用,其比例为氟化钠1,草酸钾3。此混合物4mg可使1ml血液在23天内不凝固和抑制糖分解,它是血糖测定的估良保存剂,不能用于尿素酶法测定尿素,也不有用于碱性磷酸酶和淀粉酶的测定,推荐用于血糖检测。使用时请注意缓慢颠倒混匀。
用途:血糖检测,不能用于尿素酶法测定尿素,也不能用于碱性磷酸酶和淀粉酶的测定。
当然除了上述几种常见的采血管之外,针对不同的项目还有一些对应的采血管,比如铅元素检测管、全血RNA管、血浆蛋白保存管、ACD管等等。具体对应的采血管能否适用于自家产品的检测还要根据采血管的添加剂来综合考虑。
空采血管的抽血顺序到底哪个先哪个后?
规范抽血顺序目的是为了保证标本采集质量,减少不同试管间的相互影响。根据卫生行业标准WS/T225-2002《临床化学检验血液标本的收集与处理》中规定和经验,建议真空采血管采血顺序如下:
1. 采血针采血顺序
血培养瓶(厌氧优先)
无添加剂管(红色,金黄色管)
凝血试管(蓝色)
其它有抗凝剂管(黑-绿-紫-灰)
2. 注射器采血顺序
为避免血液在注射器中停留时间过长,造成血液微小凝集,故采血顺序略有更改如下:
血培养瓶(厌氧优先)
凝血试管(蓝色)
其它有抗凝剂管(黑-绿-紫-灰)
无添加剂管(红色,金黄色管)
3. 注意事项
A.注入血液后注意摇匀,用力要适中,防止溶血。
B.注入血量要严格按照试管上标示容量。
C.不能将不同颜色管的血倒入其它颜色的管中,否则会导致错误结果。
D.针头不能接触试管壁,以免接触抗凝剂,导致错误结果。
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生物安全柜操作规范及维护保养
生物安全柜作是能防止实验操作处理过程中某些含有危险性或未知性生物微粒发生气溶胶散逸的箱型空气净化负压安全装置。是实验室生物安全中一级防护屏障中最基本的安全防护设备。为规范生物安全柜的操作,本文从人员、使用环境、设备操作流程及注意事项等几个方面进行阐述,使操作人员能够正确使用生物安全柜。
使用人员与环境
1、首先,微生物检测人员需进行生物安全柜的使用培训才能进行操作,未经正规培训人员不能使用。
2、其次,使用环境条件建议安置在10,000洁净度以上环境安置,环境在温度0~40℃、相对湿度不超过80%、无腐蚀性气体和通风良好的室内,远离高速尘源和震源。安全柜附近不得有超过安全柜正面吸入风速(>0.5m/s)的气流。禁止在有人员频繁进出的场所、门和通道口处及空调送风口附近安装使用安全柜,以免空气干扰操作口及排气口气流。在安全柜周围应留有保养检修空间(至少应在两侧留出25cm,背面留出30cm)。
使用注意事项
1、生物安全柜前窗玻璃手拉式开启,可任意定位,以保证断电时能及时关门防护。正常工作时玻璃门的开启高度到红点标注位置,如果超出或低于高度时,声光报警系统启动,提醒用户玻璃门异常。(注:当玻璃门开启时,紫外灯无法开启。)生物安全柜电源为220V、50Hz,接通电源后,通电进入待命状态。
2、在实验开始前要用70%酒精擦拭生物安全柜内表面,进行消毒除去污染,再用无菌水擦拭一遍清除残余的氯,减少实验时的交叉感染。然后将这次需要用到的所有物品移入生物安全柜内,避免双手频繁的穿过气幕破坏气流,污染样品,导致实验失败等等。
3、打开风机5分钟,等柜内空气净化并且气流稳定后再进行实验操作。将双臂缓缓伸入安全柜内,至少静止1分钟,使柜内气流稳定后再进行操作。
4、安全柜内不放和实验无关的物品,生物安全柜内部物品排放要做到物品取用方便,物品尽量靠后放置,不能挡住气道口,以免干扰气流正常流动。
5、生物安全柜操作期间,严禁使用酒精灯等明火,避免产生的热量产生气流,干扰生物安全柜内的气流稳定。
6、在实验操作时,不可打开玻璃视窗,保证操作者脸部在工作窗口之上。在柜内操作时动作要轻柔、舒缓,防止影响生物安全柜内部气流。
操作步骤
1、首次使用按下[紫外灯控制键],开启紫外灯消毒30分钟后将紫外灯关闭。(注:此时玻璃门应是关闭状态)
2、打开玻璃门到标识处。(小红标)
3、按下[风机启动键],开启风机约5分钟左右,使操作区达到规定的洁净度。
4、按下[照明控制键],开启照明灯,操作人员方可进行作业。
5、作业结束关机
当操作人员作业结束后,首先将实验使用的所有材料和其他物品从设备中取出。维持气流循环一段时间,然后关闭前窗玻璃门、风机,打开紫外灯消毒,以杀灭残留在安全柜内部的病菌。
维护与保养
1、日常维护
日常维护:运行安全柜,检查安全柜各部分功能是否正常运行。
用70%酒精擦拭设备表面和操作区表面;
用玻璃专用清洁剂清洁生物安全柜玻璃;
对操作室进行消毒灭菌处理。
2、定期维护
定期维护:每三个月对设备进行全面检查一次,认真维护保养。
全面清洗设备,并消毒灭菌;
检查各部件是否启闭灵活,各部分功能是否正常;
3、现场检测
生物安全柜的现场检测有下列情况之一时,应对生物安全柜进行现场检测:
生物安全柜安装完毕,即将使用前;
生物安全柜被移动位置后;
对生物安全柜检修后;
对生物安全柜更换高效过滤器后;
生物安全柜一年一度的常规检测。
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一般细胞培养液的pH在7.0-7.4之间。由于碳酸盐pH缓冲系统是一种生理pH缓冲系统(它是人体血液中最重要的pH缓冲系统),所以大多数培养液用它来保持稳定的pH。用粉末配制培养液时,常常需要加入一定量的碳酸氢钠。对大多数以碳酸盐作为pH缓冲系统的培养液而言,以为了维持稳定的pH,培养箱中的二氧化碳需要维持在2-10%之间,以保持培养液中溶解的二氧化碳的浓度。同时细胞培养的器皿需要一定程度的透气,以便于气体的交换。
是不是采用其他pH缓冲系统就不需要二氧化碳培养箱了呢?人们发现由于空气中的二氧化碳浓度很低,如果细胞不在二氧化碳培养箱中培养,培养液中的HCO3-会被耗尽,这样会影响细胞的正常生长。所以大部分动物细胞的培养,还是需要二氧化碳培养箱。
在过去的数十年间,细胞生物学、分子生物学、药理学等的研究领域都有了惊人的长足进步,同时,这些领域中的技术应用也不得不跟上“脚步"。虽然典型的生命科学实验室设备有了很大的改变,但二氧化碳培养箱依然是实验室中的主要组成部分,其使用的最终目的都是维持和促使细胞和组织更好地生长。然而,随着技术的进步,其功能和运作都变得越来越精确、可靠和方便。如今,二氧化碳培养箱已成为实验室最普遍使用的常规仪器之一,已广泛应用于医学、免疫学、遗传学、微生物、农业科学、药物学的研究和生产。
CO2培养箱是通过对周围环境条件的控制制造出一个能使细胞/组织更好地生长的环境,条件控制的结果就会形成一个稳定的条件:如恒定的酸碱度(pH值:7.2-7.4)、稳定的温度(37°C)、较高的相对湿度(95%)、稳定的CO2水平(5%),这就是为什么上述领域的研究员如此热衷于使用方便稳定可靠的二氧化碳培养箱。
此外,由于增加了二氧化碳浓度控制,并且使用微控制器对培养箱温度进行精确控制,使生物细胞,组织等的培养成功率、效率都得到改善。总之,二氧化碳培养箱是普通电热恒温培养箱不可替代的新型培养箱。
使用者对二氧化碳培养箱的选购最关心的当然就是其可靠性、污染物的控制和使用方便。CO2培养箱主要控制模拟活体内环境相关的3个基本变量:稳定的CO2水平、温度、相对湿度。要有稳定的培养环境,就要考虑这三方面的影响因素,选购时,就应该对这些“重中之重"有一定的了解才能选到适合自己的仪器。但是,其它的一些方面的“小"因素也不能忽略,因为这些都会影响仪器的使用价值和寿命。选购时,就应该从各方面的因素加以考虑。图片
温度控制:
保持培养箱内恒定的温度是维持细胞健康生长的重要因素。当选购二氧化碳培养箱时,有两种类型的加热结构可供选择:气套式加热和水套式加热。虽然这两种加热系统都是精确和可靠的,但是它们都有着各自的优点和缺点。水套式培养箱是通过一个独立的热水间隔间包围内部的箱体来维持温度恒定的。热水通过自然对流在箱体内循环流动,热量通过辐射传递到箱体内部从而保持了温度的恒定。独特的水套式设计有其优点:水是一种很好的绝热物质,当遇到断电的时候,水套式系统就能更可靠地长久保持培养箱内的温度准确性和稳定性(维持温度恒定的时间是气套式系统的4-5倍)。如果您的实验环境不太稳定(如有用电限制,或者经常停电)并需要保持长时间稳定的培养条件,此时,水套式设计的二氧化碳培养箱就是您最好的选择。而气套式加热系统是通过箱体内的加热器直接对箱内气体进行加热的。气套式设计在箱门频繁开关引起的温度经常性改变的情况下能够迅速恢复箱体内的温度稳定。因此,气套式与水套式相比,具有加热快,温度的恢复比水套式培养箱迅速的特点,特别有利于短期培养以及需要箱门频繁开关的培养。此外,对于使用者来说气套式设计比水套式更简单化(水套式需要对水箱进行加水、清空和清洗,并要经常监控水箱运作的情况)。在购买气套式培养箱时,要注意的是:为了不影响培养,培养箱还应该有一个风扇以保证箱内空气的流通和循环,此装置还有助于箱内温度、CO2和相对湿度的迅速恢复。
此外,有些类型的二氧化碳培养箱还具备外门及辅助加热系统,这个系统能加热内门,提供给细胞良好的湿度环境,保证细胞渗透压维持平衡,且可有效防止形成冷凝水以保持培养箱内的湿度和温度。如果您的培养环境需要精确的控制,那么这个辅助系统则是必不可少的。
CO2控制:
CO2 浓度探测可通过两种控制系统——红外传感器(IR)或热传导传感器(TC)进行测量。当二氧化碳培养箱的门被打开时,CO2从箱体内漏出,此时传感器就会探测到CO2浓度的降低,并做出及时的反应,重新注入CO2使其恢复到原先预设的水平。热传导传感器(TC)监控CO2浓度的工作原理是通过测量两个电热调节器(一个调节器暴露于箱体环境内,另一个则是封闭的)之间的电阻变化来实现的。箱内CO2浓度的变化会改变两个电热调节器间的电阻,从而促使传感器产生反应以达到调节CO2水平的作用。TC控制系统的一个缺点就是箱内温度和相对湿度的改变会影响传感器的精确度。当箱门被频繁打开时,不仅CO2浓度,温度和相对湿度也会发生很大的波动,因而影响了TC传感器的精度。当需要精确的培养条件和频繁开启培养箱门时,此控制系统就显得不太适用了。红外传感器(IR)作为另一个可选择的控制系统比TC系统具备更精确的CO2控制能力,它是通过一个光学传感器来检测CO2水平的。IR系统包括一个红外发射器和一个传感器,当箱体内的CO2吸收了发射器发射的部分红外线之后,传感器就可以检测出红外线的减少量,而被吸收红外线的量正好对应于箱体内CO2的水平,从而可以得出箱体内CO2的浓度。因为IR系统不会因温度和相对湿度的改变而受到影响,所以它比TC系统更精确,特别适用于需要频繁开启培养箱门的细胞培养。然而,此系统比TC系统更贵,这时就要结合经费预算进行考虑了。
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