货号： abs590012

胶原酶可用于在体外分离多种组织为单细胞，适用于各种科研用途的器官，组织的单细胞解离。生物制品生产相关法规中明确了细胞培养相关材料检测的必要性，故胶原酶的残留量检测也愈发引起重视。

胶原酶I型（Collagenase Type I）残留检测试剂盒采用基于多克隆抗体的双抗夹心酶联免疫吸附法，针对从溶组织梭状芽孢杆菌中获得的胶原酶混合物而开发，可以快速，有效地检测各种样品中胶原酶的残留量。

专属性应针对工艺中存在的其他物质进行相关验证。建议釆用高浓度与低浓度质控样品，加入递增浓度的相关干扰物质进行特异性考察。未加入分析物的基质也应同时被测量。质控品的准确度应在一定范围内，且未加入分析物的基质的测量值应低于定量下限。

产品特点：

准确检测：针对胶原酶混合物制备的多抗可以进行有效检测

特异性强：与细胞培养常用的其他非目标蛋白无交叉反应

性能优秀：检测限低至0.1 ng/mL，准确度高，重复性好

适用性广：可以使用生产工艺中实际使用的特定来源的胶原酶自行建立标准曲线，进一步保证结果的准确性。

产品性能指标：

线性范围：0.156-10ng/mL

定量限：0.156ng/mL

检测限：＜0.1ng/mL

准确度（加标回收率）：70%-130%

准确度（测量偏差）：≤15%

重复性（批内差）：≤10%

检验原理

本试剂盒应用双抗体夹心酶联免疫吸附检测技术测定样品中来源于溶组织梭状芽孢杆菌胶原酶Ⅰ型（Collagenase Type Ⅰ）（以下简称胶原酶）的微量残留。用捕获抗体包被 96 孔酶标板，制成固相抗体，随后加入标准品和检测样品，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的标记抗体，形成一个固相抗体-胶原酶-标记抗体的三明治结合物，反应结束后洗涤，然后加入底物进行显色反应，底物在 HRP 的催化下由无色转变成蓝色，并在终止液的作用下转变成最终的黄色。在 450nm 和630nm 波长下测定其吸光度（OD 值），其中 630nm 为校正波长。结果计算（OD450nm-OD630nm-空白对照孔吸光度值）差值，通过标准曲线 （推荐使用四参数 Logistic 数学模型拟合方程）计算待测样品中胶原酶的含量。

产品组成

使用方法

一、准备工作

1、试剂盒准备

将试剂盒各组份放置室温平衡 30min 后开始操作。

2、需要的耗材及设备（注：需自备）

（1）酶标仪、恒温振荡器（或恒温培养箱）、洗板机（洗板方式为手洗可不用）、漩涡振荡器、计时器

（2）高精度移液器及一次性吸头（0.5-10µL、10-100µL、30-300µL、100-1000µL）

（3）去离子水

（4）吸水纸、EP 管、一次性手套

3、试剂准备（注：根据试剂盒提供的组分按照需求配制）

（1）洗液（1×）：取洗液（20×）加去离子水稀释 20 倍备用，如：取洗液（20×）10mL 加去离子水 190mL 混匀。

（注：洗液（20×）中如果有结晶形成，应置于室温或 37℃水浴轻轻摇晃，待结晶完全溶解后再进行稀释）

（2）酶标抗体溶液配制：用稀释液将酶标抗体（10×）稀释 10 倍配制成酶标抗体溶液（1×）。例如：100μL 酶标抗体加入 900μL 稀释液中。

（3）显色液的配制：将显色液 A、显色液 B 等体积混合，混匀后避光放置（注：时间不能放置太久，一般使用前 10min 配制。如混合后显色液已经变蓝，请勿使用）。

4、样本准备

将样本恢复至室温，加样前混匀（样本应为均一溶液，若有沉淀则需离心测上清）；用户如需稀释样品或盒中配套的高浓度标准品，可使用盒中稀释液进行稀释。

二、操作流程

1、操作简图

2、操作详细步骤

所有操作在室温下进行，建议所有加样孔进行复孔测定。

（1）将试剂盒各组份恢复室温 30min，从已平衡至室温的铝箔袋中取出试验所需板条，用记号笔标记板条顺序，剩余板条用封板膜封板后重新放回铝箔袋中，封好，置于 2-8℃保存。

（注：在洗板过程中板条容易脱落，注意做好标记。）

（2）样品温育：将稀释后的标准品和待测样本加入酶标板中（加入顺序建议：标准品孔、空白孔、样本孔，标准品按照浓度梯度加入），100µL/孔，用封板膜封板，然后置于 37℃静置温育 1h。

（注：加样时间控制在 10min 以内，避免随时间出现的漂移。温育过程中如果不封板或者封板不完全，会导致反应液蒸发，导致实验出现误差。）

（3）洗板：温育完成后，小心揭去封板膜，弃去孔中液体，用洗液（1×）洗板 3 次（250µL /孔），拍干样品孔中的残留液体。（如果洗板方式为手洗，加洗液（1×）后可静置 1min；如果采用洗板机洗板，加洗液后可轻微震荡 5s）

（4）酶标抗体溶液温育：每孔加入酶标抗体溶液，100µL/孔，用封板膜封板，然后置于 37℃ 静置温育 1h。

（注：每次洗板后加液前，均应检查板条是否固定，防止加液后再固定板条导致液体溅出。）

（5）洗板：同步骤（3）。

（6）显色：将预先配置好的显色液加入酶标板中，100µL/孔，用封板膜封板，37℃避光静置温育 20min。

（7）终止：加入终止液，100µL/孔，显色均匀后即可读数（注：一般加入终止液 20min 内完成读数）。

（8）读数：将酶标板放入酶标仪中，设置波长为双波长 450/630nm，读取吸光度值（注：建议在酶标仪读数程序中设置 5-10s 的震荡）。

三、数据处理

1、吸光度值的计算

每个标准品或样品的光吸收校准值为：

OD450nm-OD630nm-空白对照孔吸光度值

2、以标准品浓度校准值为横坐标（X），标准品光吸收校准值为纵坐标（Y），绘制标准曲线，推荐使用四参数 Logistic 数学模型拟合方程：

Y=((A-D)/(1+(X/C)^B))+D

以样品OD值（OD450nm-OD630nm-空白对照孔吸光度值）代入公式计算样品中胶原酶的含量。

3、如果待测样本 OD 值超出标准曲线最高点 OD 值，需将样本进行稀释后重新测定。

示例展示：

以下标准曲线图仅供参考，应以同次实验标准品所绘标准曲线为准。

标准品浓度（ng/mL） OD 值101.543650.83492.50.39221.250.20540.6250.09910.3130.04840.1560.0203

储存/保存方法

试剂盒应在 2-8℃条件下避光保存，有效期为 12 个月。开封后未使用完的试剂盒注意仍在 2-8℃条件下避光保存。

注意事项

1、试剂盒内所有组分都必须恢复至室温（20-25℃）后方可使用。

2、各组分使用前需充分混匀，以保证试剂的均一性，标准品还需短暂离心 5 秒，将管壁及盖子上的液体全部集中于管底，使用后立即将所有试剂放回 2-8℃。

3、试剂盒必须在有效期内使用，每次试验均需重新制备相应的标准曲线，不建议不同标准曲线之间混用，不建议不同批次的相关试剂混用。

4、酶标板加液时注意不要触碰到微孔板底部，防止破坏包被层。不同样本骤间及时更换加样槽和吸头，避免交叉污染。

5、板条洗涤后拍干时，注意防止板条脱落，封板膜注意不能重复使用。

6、显色时高浓度可能会产生黑色絮状物，建议将样本进行稀释复测。

7、读数时注意核对检测波长及拟合方程选择是否正确。

8、只有严格遵守说明书的操作方法，全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证最佳检测效果。

9、该试剂盒采用精确定量的高纯度高活性胶原酶作为标准品，对于绝大多数来源于溶组织梭菌的Ⅰ型胶原酶都适用，可以直接检测不同来源的胶原酶残留水平，可针对默克 Sigma-Aldrich 胶原酶进行更精准的检测。为了进一步保证结果的准确性，也可以使用生产工艺中实际使用的特定来源的胶原酶自行建立标准曲线。

10、检测结果的不同可由多种因素引起，包括实验人员的操作、移液器的使用方式、洗板技术、反应时间或温度、试剂盒的储存等。

11、本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

12、本试剂盒内终止液为酸溶液，操作时应格外注意。

13、出于安全考虑，操作者应穿戴个人防护设备，如实验服、手套、口罩和护目镜。

温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究

更多文章推荐

BSA残留检测试剂盒说明书-[爱必信absin]

RNA免疫共沉淀(RIP)试剂盒说明书-[爱必信absin]

尿酸酶检测试剂盒说明书-[爱必信absin]