狂犬病ELISA试剂盒

1.规格：96孔/盒；

2.用途：应用间接酶联免疫法(ELISA)检测犬血清或血浆中抗狂犬病毒 IgG 抗体，适用于犬狂犬病毒的免疫效果监测和抗体水平调查；

3.试剂盒组成:

预包被狂犬病毒抗原的微孔板：192孔；狂犬病毒IgG 酶标记物：1瓶；狂犬病毒IgG 阳性对照(直接使用)：1支；狂犬病毒IgG临界对照(直接使用)：1支；狂犬病毒IgG阴性对照(直接使用)：1支；显色液A：1瓶；显色液B：1瓶；终止液：1瓶；浓缩洗涤液(10倍)：1瓶；样品稀释液：2瓶；封板膜：2片；密封袋：1个；使用说明书：1份；记录纸：1份。

4.所需仪器:

450nm波长的酶标仪；(10～100)μL 移液器；37℃恒温箱或水浴箱。

5.样本要求:

分离样品：将采集到的待检犬血液样品离心，分离出待检犬血清或血浆。

使用无菌犬血清或血浆进行检测，应尽量避免使用染菌、溶血和高血脂的样品；室温保存样品不要超过 8 小时，若实验在 8 小时以后进行，需将样品保存在(2～10)℃，如保存超过1周则应保存在-20℃并避免反复冻融。

6.操作步骤:

1)试剂盒放置室温平衡(20～30)min。取出浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水作10倍稀释备用。

2)稀释样品：将已分离好的犬血清或血浆用样品稀释液做1:10稀释，即取50μL血清或血浆加入到0.5mL样品稀释液中，并充分混匀。

3)加样：取所需量的预包被微孔板条固定于板架上，依次加入稀释好的样品，100μL/孔，然后将阳性、阴性对照各加1孔，临界对照加3孔，100μL/孔，另留一孔不加样品作空白对照孔，在记录纸上记录各样品和参 考品的次序或位置。

4)孵育：加样完成后，置37℃恒温箱或水浴箱(用封板膜覆盖板条，以避免水珠滴入微孔)中孵育30min。

5)洗板：甩净孔中液体，拍干，用稀释好的洗涤液加满每孔，停留1min后甩净、拍干，反复洗板3次。

6)加酶：除空白对照外，其余各孔垂直滴加酶标记物50μL(1滴)，置37℃孵育30min。

7)显色：重复步骤5洗板3次，拍干后每孔(含空白孔)垂直滴加显色液A、B各50μL(1 滴)，置37℃避光显色10min。

8)终止：每孔(含空白孔)立即加入终止液50μL(1滴)，混匀后以空白孔调零，用酶标仪450nm波长测定A/OD值。

7:结果判定：在酶标仪上，以空白孔调零，450nm波长测定A/OD值。阴性对照值应≤0.10，临界对照A/OD值应在0.15～0.40之间，证明实验成立。如样品孔A/OD值≥临界对照A/OD值的平均值判为阳性，达到抗体保护水平；反之为阴性。

8:有效期：贮藏要求：2℃～8℃。

1、规格 ：4X96/盒

2、简介：此试剂用竞争 ELISA 法检测小反刍兽疫病毒核蛋白的抗体。检测绵羊、山羊的血清或血浆。

3、实验原理：微量滴定板用 PPR 核蛋白（NP)包被。加入样本和对照，如样本中含有 NP 抗体，将形成抗原-抗体复合物。加入过氧化物酶结合物，它与没有结合的 NP 的点位结合，形成抗原-酶结合物复合体。经过洗板洗掉没结合的酶结合物，加入含底物 TMB 液。呈色反应是与样本中抗体含量成反比,若无抗体，溶液将呈现蓝色，并在加入终止液后转为黄色。抗体存在的情况下将不呈现任何显色反应。在 450nm 波长检测 OD 值。

4、试剂盒内容：

试剂微量滴定板，已用重组 PPR 核蛋白（NP)包被酶结合物浓缩液（10X）阳性对照阴性对照样品稀释液 13样品稀释液 4浓缩洗涤液（20X）底物溶液终止液（H2SO4 0.5M）

4.1、酶结合物、阴阳性对照以及底物溶液必须在 5℃（±3℃）下贮存。

4.2、其它试剂可放置+2℃～+26℃保存。

4.3、洗涤液和样品稀释液可用于 ID VET 所有系列产品。

5、自备材料：

5.1、微量移液器，10μL、100μL、200μL 的单道或多道微量移液器。

5.2、一次性移液器吸头。

5.3、96 孔酶标仪。

5.4、蒸馏水

5.5、手动或自动洗涤设备。

6、注意事项:

6.1、严禁用嘴吸液

6.2、底物对皮肤有刺激作用。

6.3、终止液（H2SO4 0.5M）可导致严重烧伤。若接触到皮肤或眼睛，请及时用大量清水洗涤和就医。

6.4、避免底物照到强光或接触到氧化物。

6.5所有单独使用的材料应净化消毒，浸在新配的 5%次氯酸钠溶液中最少 1 小时或 120℃高压灭菌。

6.6样品准备:为保证不同样品孵育时间一致，可用 96 孔板盛装待检样本和对照，然后用多道移液器转移到 ELISA 微量滴定板中。

6.7、洗涤液的准备：

6.7.1浓缩洗涤液（20X）使用前恢复至室温（18-25℃）并充分混匀保证充分溶解。

6.7.2用蒸馏水按照 1：20 的比例的稀释浓缩洗涤液（20X）制备洗涤液（1X）（1 份浓缩洗涤液加 19 份蒸馏水）

7、检测步骤：在使用前，所有的试剂盒组分都必须回复到室温（21℃±5℃）。试剂应通过轻轻涡旋、旋转混合均匀。

7.1加样：

7.1.1每孔加入 25μL 样品稀释液 13。

7.1.2孔 A1 和 B1 分别加入 25μL 阳性对照。

7.1.3孔 C1 和 D1 分别加入 25μL 阴性对照。

7.1.4剩下孔内加入 25μL 样品用于检测。

7.2、37℃（±3℃）下孵育 45min±4min。

7.3、甩干板中液体，用 300μL 左右的洗涤液洗涤每个板孔 3 次。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。

7.4、用样品稀释液 4 按照 1：10 的比例的稀释浓缩酶标结合物（10X）制备酶标结合物（1X）

（1 份浓缩酶标液加 9 份样品稀释液）。

7.5、吸取 100μL 的酶标记结合物（1X）加入到每孔中。

7.6、21℃（±5℃）下孵育 30min±3min。

7.7、甩干板中液体，用 300μL 左右的洗涤液洗涤每个板孔 3 次。在洗涤和加入下一个试剂前，避免孔壁变干。

7.8、吸取 100μL 的底物溶液加入到每孔中。

7.9、21℃（±5℃）下暗处孵育 15min±2min。

7.10、在每孔中加入 100μL 的终止液终止显色反应。

7.11、在酶标仪的 450nm 波长读结果。

8、实验有效性：

在下列情形下实验有效：

阴性对照的平均 OD 大于 0.7

OD_NC＞0.7

  阳性对照平均 OD 值小于阴性对照的 30%

  OD_PC/OD_NC＜0.3

9、结果判定：

对于每个样品，计算其竞争百分比（S/N%）

  S/N%＝ODsample/ODnc×100

每个样品得出一个（S/N %）

值结果S/N%≤50%阳性50%＜S/N%≤60%可疑S/N%>60%阴性

10、到用户手上保质期大于等于6个月

100ml/瓶

100支/包

100支/包

100支/盒

100支/盒

100支/盒

100支/盒

50件/箱

100支/箱

250g/袋*40袋/箱