1、生化 培训教材 sh001 简明生化分析临床知识 v1.0 1简明生化分析临床知识目录 .1 1.常用临床生化项目的分类：.2 1.1.按化学性质分类：.2 1.1.1.酶类： .2 1.1.2.底物 /代谢产物类：.2 1.1.3.无机离子类：.2 1.1.4. 特种蛋白类：.2 1.2.按临床应用分类.2 2.常用临床生化项目的主要测定原理和临床意义：.2 3.试剂： .7 3.1.临床生化检测试剂的发展历史.7 3.2.双试剂的优点.7 4.全自动生化分析仪采取二步法测定的意义.8 4.1.双试剂与单试剂的区别.8 4.2.测定时采用一步法还是两步法.9 4.2.1.试剂本身的干扰.9

2、4.2.2.样品干扰 .9 生化培训教材 sh001 简明生化分析临床知识 v1.0 21. 常用临床生化项目的分类：1.1.按化学性质分类：1.1.1.酶类：包括 alt （谷丙转氨酶） ，ast（谷草转氨酶） ，alp （碱性磷酸酶） ，acp（酸性磷酸酶） ，r-gt（谷氨酰转移酶） ， -hbdh （羟丁酸酶） ，ldh （乳酸脱氢酶） ，ck（肌酸激酶） ，ck-mb （肌酸激酶同功酶）,-amy （淀粉酶），mso（） ， ada （） ，che（胆碱脂酶）等。1.1.2.底物 /代谢产物类：包括tg（甘油三脂） ，tc（总胆固醇） ，hdl-c （高密度脂蛋白胆固醇），ldl-c

3、 （低密度脂蛋白胆固醇） ，ua（尿酸），urea （尿素氮），cr（肌酐），glu（葡萄糖），tp（总蛋白），alb（白蛋白），t-bil（总胆红素），d-bil（直接胆红素） ， tba（总胆汁酸），nh4+（血氨） ,co2（二氧化碳）等。1.1.3.无机离子类：包括 ca（钙） ，p（磷），mg（镁），cl（氯）等。1.1.4.特种蛋白类：(1)脂蛋白类：包括apoa1（载脂蛋白a1） ，apob（载脂蛋白b） ，lp(a) （脂蛋白a）等。(2)补体类：包括c3，c4，pfb(b 因子 )等。(3)免疫球蛋白类：包括igg，iga ，igm ，kappa 链， lambda 链等。(

4、4)急性时相反应蛋白：包括crp (c 反应蛋白 )，aag (a1 酸性糖蛋白 )，cer(铜蓝蛋白 )等。(5)其它：包括 aat (a1 抗胰蛋白酶 )，amg (a2 巨球蛋白 )，trf(转铁蛋白 )，hpt(触珠蛋白 )，at-iii( 抗凝血酶iii) ，pab(前白蛋白 )，b2m( 2 微球蛋白 )，ma( 微白蛋白 )，a1m(a1 微球蛋白 )，aso( 抗链球菌溶血素o)等。1.2.按临床应用分类无机离子：包括ca，p，mg ，cl 等。肝功能：包括alt ，ast，r-gt ，alp，mso，t-bil ，d-bil ，tba ，tp，alb 等。肾功能： ua ，u

5、rea ，cr 等。心肌酶谱： ck ，ck-mb ，ldh ， -hbdh ， ast，mso 等。糖尿病： glu 等。前列腺疾病： acp ，p-acp 等。胰腺炎： -amy 。血脂： tc， tg，hdl-c ，ldl-c ，apoa1，apob，lp(a)。痛风： ua 中毒： che 免疫性疾病： c3，c4，pfb(b 因子 )， igg ，iga ，igm ，kappa 链， lambda 链。急性炎症反应：crp (c 反应蛋白 )，aag (a1 酸性糖蛋白 )，cer(铜蓝蛋白 )，aso(抗链球菌溶血素o)。2. 常用临床生化项目的主要测定原理和临床意义：项目测定原理

6、临床意义alt l-丙氨酸+-酮戊二酸alt丙酮酸+l-谷氨酸丙酮酸+nadh+hldhl-乳酸+nad+h2onadh 的减少，引起340nm 吸光度的下降，下降速率与alt 活性成alt 主要存在于肝细胞中，心肌细胞次之，活性升高表示有肝细胞损生化培训教材 sh001 简明生化分析临床知识 v1.0 3正比 (动力学法 )。伤，也可见于心肌及骨骼肌损伤。ast l-门冬氨酸 +-酮戊二酸ast草酰乙酸 +l-谷氨酸草酰乙酸 +nadh+hmdhl-苹果酸+nad+h2onadh 的减少，引起340nm 吸光度的下降，下降速率与ast 活性成正比 (动力学法 )。ast 主要存在于心肌细胞中

7、，肝细胞次之，活性 升 高 表 示 有心 肌 损伤，也可见于肝细胞及骨骼肌损伤。alp 磷酸对硝基苯 +h20alp磷酸盐+对硝基苯酚对硝基苯酚的生成，引起405nm 吸光度的上升，上升速率与alp 活性成正比 (动力学法 )。alp 主要存在于骨、肝、肾和肠，活性升高见于肝胆及骨骼疾病等。r-gt l-r- 谷氨酰-3- 羧基-4- 硝基苯氨 +双苷肽r-gtr- 谷氨酰双苷肽 +5-氨基-2- 硝基苯甲酸盐5-氨基 -2-硝基苯甲酸盐的生成，引起 405nm 吸光度的上升， 上升速率与 r-gt 活性成正比 (动力学法 )。活性升高与肝胆疾病、心肌梗塞、脑损伤、慢性酒精中毒、苯妥英钠治疗有

8、关。-hbdh -酮丁酸+nadh+h-hbdh-羟丁酸+nadnadh的减少，引起340nm 吸光度的下降，下降速率与 -hbdh活性成正比 (动力学法 )。活性升高与急性心肌梗塞有关。ldh l-乳酸+nadldh丙酮酸+nadh+hnadh 的生成， 引起 340nm 吸光度的上升， 上升速率与ldh活性成正比 (动力学法 )。活性升高与心肌梗塞有关,也可见于肝脏疾病、未治愈的恶性贫血、巨幼红细胞贫血、肾脏疾病、恶性肿瘤等。ck 磷酸肌酸 +adpck肌酸+atp葡萄糖+atphk葡萄糖-6- 磷酸+adp葡萄糖-6- 磷酸+nadpg6pdh6-磷酸-葡萄糖酸 +nadph+hnadp

9、h 的生成， 引起 340nm 吸光度的上升，上升速率与ck活性成正比 (动力学法 )。活性升高与心肌梗塞有关 ,也可见于肌营养不良、甲状腺机能减退、肺梗塞、急性脑血管疾病等。ck-mb 先用 ck-m 的抗体抑制ck-m 的活性，其余同ck 的测定活性升高主要见于心肌梗塞。-amy 1用生色基团对 -硝基酚修饰 -麦芽七糖苷 (pnp-g7)作为底物，经 -淀粉酶水解成小分子的寡糖苷， 再经辅助酶 -葡萄糖苷酶进一步水解释放出生色基团pnp ，导致 405nm吸光度增加，增加速率与-amy 活性成正比， roche公司等采用此法。2用生色基团对 -硝基酚修饰麦芽五糖苷 (pnp-g5)作为底

10、物，其余同1。日本第一化学采用此法， ifcc 推荐。 3采用 2-氯-4- 硝基苯酚 -麦芽三糖 (cnp-g3)做底物，不需要用辅助酶， 直接由淀粉水解产生cnp ，导致 405nm吸光度增加，增加速率与-amy 活性成正比，科华采用此法。活性升高见于急性胰腺炎、胰腺管道阻塞、流行性腮腺炎、细菌性腮腺炎等。tg 甘油三脂 +h2o脂蛋白脂酶甘油+脂肪酸甘油+atp甘油激酶l-磷酸甘油 +adpl-磷酸甘油 +o2磷酸甘油氧化酶磷酸二羟丙酮 +h2o2h2o2+4-aa+espas过氧化物酶醌亚胺+h2o醌亚胺的生成，导致550nm 吸光度的增加，增加的程度与tg 的含量升高见于肾病综合症、

11、动脉粥样硬化、甲减、糖尿病、肝病等，降低见于营养不良、脂蛋白缺乏、甲亢、恶液质生化培训教材 sh001 简明生化分析临床知识 v1.0 4成正比 (终点法 )。等。tc 总胆固醇 +h2o胆固醇脂酶游离胆固醇 +脂肪酸游离胆固醇 +o2胆固醇氧化酶4-胆甾烯酮 +h2o2h2o2+4-aa+espas过氧化物酶醌亚胺+h2o醌亚胺的生成，导致550nm 吸光度的增加，增加的程度与tc 的含量成正比 (终点法 )。升 高 见 于 动 脉粥 样 硬化、肾病、糖尿病、粘液水肿等，降低见于甲亢、贫血、吸收障碍、恶液质等。hdl-c 沉淀法：先用磷钨酸钠-镁沉淀 ldl-c 和 vldl-c ，再按 t

12、c 方法测定。均相法：先用多聚阴离子化合物选择性遮蔽ldl-c 和 vldl-c ，再按tc 方法测定。含量越低，发生冠心病的危险越大。ldl-c 沉淀法：先用pvs 沉淀 ldl-c ，再按 tc 方法测定， tc 值减去该测定值即为 ldl-c 。均相法：先用多聚阴离子化合物选择性遮蔽hdl-c 和 vldl-c ，再按 tc 方法测定。含量越高，发生冠心病的危险越大。ua 尿酸+o2+h2o尿酸酶尿囊素+co2+h2o2h2o2+4-aa+espas过氧化物酶醌亚胺+h2o醌亚胺的生成， 导致 550nm 吸光度的增加， 增加的程度与ua 的含量成正比 (终点法 )。升高与痛风、白血病、

13、妊毒血症、肾病有关。urea 二乙酰肟法：二乙酰肟与强酸作用生成二乙酰，二乙酰与urea在酸性条件下， 缩合成红色的二嗪衍生物，导致 520nm 吸光度的增加，增加的程度与uaea 的含量成正比 (终点法 )。紫外 -谷氨酸脱氢酶法：尿素+2h+h2o尿酸酶2nh4+co2nh4+-酮戊二酸 +nadh谷氨酸脱氢酶谷氨酸 +nad+h2onadh的减少，引起340nm 吸光度的下降，单位时间内下降程度与urea 浓度成正比 (固定时间法、两点速率法)。升 高 主 要 见 于肾 脏 疾病，也可见于脱水、糖尿病昏迷、肾上腺危相、胃肠道出血、 循环虚脱，下降见于严重的肝脏疾病。cr 碱性苦味酸法：肌

14、酐+苦味酸碱性溶液肌酐-苦味酸复合物肌酐 -苦味酸复合物的生成，导致510nm 吸光度的增加，单位时间内增加量与 cr 浓度成正比 (固定时间法、两点速率法)。肌氨酸氧化酶法：肌酐+h2o肌酐氨基水解酶肌酸肌酸+o2+h2o肌酸眯基水解酶肌氨酸+尿素h2o2+4-aa+espas过氧化物酶醌亚胺+h2o肌氨酸+o2+h2o肌氨酸氧化酶甘氨酸+hcho+h2o2醌亚胺的生成，导致 550nm吸光度的增加，增加的程度与cr 的含量成正比 (终点法)。升 高 见 于 肾 功能 的 损伤。生化培训教材 sh001 简明生化分析临床知识 v1.0 5glu 氧化酶法：h2o2+4-aa+espas过氧化

15、物酶醌亚胺+h2o葡萄糖+o2+h2o葡萄糖氧化酶葡萄糖酸 +h2o2醌亚胺的生成， 导致 500nm 吸光度的增加， 增加的程度与glu 的含量成正比 (终点法 )。己糖激酶法：葡萄糖 -6- 磷酸+nadg-6-pdh6-磷酸葡萄糖酸 +nadh+h+葡萄糖 +atp己糖激酶葡萄糖 -6- 磷酸+adpnadh 的生成，引起340nm 吸光度的增加，增加程度与glu 浓度成正比 (终点法 )。升高主要见于糖尿病，也可见于甲亢、垂体或肾上腺机能亢进；降低主要见于胰岛素过量、甲减、垂体机能减退、肾上腺机能减退、葡萄糖吸收障碍。tp 肽键+cu2+碱性条件紫红色络合物紫红色络合物的生成，导致54

16、0nm 吸光度的增加，增加的程度与tp的含量成正比 (终点法 )。升 高 见 于 各 种原 因 失水、一种或多种球蛋白分泌增多；降低见于营养不良。alb 白蛋白+溴甲酚绿ph4.2白蛋白溴甲酚绿复合物白蛋白溴甲酚绿复合物的生成，导致 630nm 吸光度的增加， 增加的程度与 alb 的含量成正比 (终点法 )。升 高 见 于 各 种原 因 失水；降低见于肝脏疾病、肾病综合症、 营养不良、蛋白丢失。t-bil 总胆红素 +2p-苯璜基重氮 1，5-苯二璜酸盐ph1.42偶氮胆红素二甲亚砜重氮偶合法、比色法、终点法。冻干单剂型偶氮胆红素的生成，导致545nm 吸光度的增加，增加的程度与t-bil的

17、含量成正比 (终点法 )。胆红素钒酸盐 胆绿素ph3.0 表面活性剂 钒酸盐氧化法，比色法，终点法，液体双剂型胆红素的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的变化与总胆红素含量成正比。升 高 见 于 各 类肝 脏 疾病，也可见于溶血性疾病。d-bil 直接胆红素 +2p-苯璜基重氮 1，5-苯二璜酸盐ph2.02偶氮胆红素重氮偶合法、比色法、终点法，冻干单剂型偶氮胆红素的生成，导致545nm 吸光度的增加，增加的程度与d-bil的含量成正比 (终点法 )。胆红素钒酸盐 胆绿素ph3.0 表面活性剂 钒酸盐氧化法，比色法，终点法，液体双剂型胆红素的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，

18、吸光度的变化与直接胆红素浓度成正比。升高见于各类肝脏疾病和胆导阻塞。生化培训教材 sh001 简明生化分析临床知识 v1.0 6nh4+ nh4+nadh+h+-酮戊二酸gldh谷氨酸 +nad+h2onadh 的减少， 引起 340nm 吸光度的下降， 下降程度与nh4+浓度成正比 (终点法 )。升高见于肝昏迷、肝性脑病。co2 磷酸稀醇式丙酮酸 +hco3-pepc草酰乙酸 +磷酸草酰乙酸 +nadhmdh苹果酸+nad+nadh 的减少，引起340nm 吸光度的下降，下降程度与co2 浓度成正比 (终点法 )。异 常 见 于 酸 碱平 衡 失调。ip ip+钼酸+硫酸未还原磷酸钼酸络合物

19、络合物的生成，引起340nm 吸光度的上升，上升程度与ip 浓度成正比(终点法 )。升高见于慢性肾炎、甲状旁腺功能减退、vitd过多；降低见于佝偻病、骨软化等。ca 邻-甲酚肽络合酮 (cpc)法ca2+cpc碱性条件有色络合物有色络合物的生成，引起575nm 吸光度的上升，上升程度与ca 浓度成正比 (终点法 )，长征公司采用此法。甲基麝香草酚兰(mtb) 法ca2+mtb碱性条件有色络合物有色络合物的生成，引起612nm 吸光度的上升，上升程度与ca浓度成正比 (终点法 )，科华公司采用此法。升高见于甲状旁腺功能亢进、肿瘤骨转移、vitd过多；降低见于甲状旁腺功能减退、佝偻病、肾病等。mg

20、 mg2+mtb碱性条件有色络合物egta有色络合物的生成，引起 582nm 吸光度的上升， 上升程度与mg 浓度成正比 (终点法 )。升高见于尿毒症；降低见于吸收障碍、糖尿病性昏迷、急慢性酒精中毒、慢性肾病等。cl hg(scn)2+cl-hgcl2+scn-scn-+fe3+fe(scn)3(红色络合物)红色络合物的生成，引起480nm 吸光度的上升，上升程度与cl 浓度成正比 (终点法 )。升高见于柯兴综合症、酸中毒、尿毒症等；降低见于阿狄森氏病、碱中毒、腹泻、尿崩等。apoa1/ apob apoa1/apob+ 抗体缓冲环境抗原抗体复合物液相抗原抗体复合物的形成，导致 340nm 透

21、射浊度的增加， 增加的程度与apoa1/apob 的浓度成正比 (终点法 )。apoa1 降低和 apob 升高 见 于 未 控 制的 糖 尿病、肾病综合症、肝功能低下；apoa1 和 apob均降低见于长期血液透析； apoa1 与 apob 的比值可预测心血管疾病危险性的预测， 比值高，危险性低。生化培训教材 sh001 简明生化分析临床知识 v1.0 7lp(a) lp(a)+ 抗体缓冲环境抗原抗体复合物液相抗原抗体复合物的形成，导致 340nm 透射浊度的增加， 增加的程度与lp(a)的浓度成正比 (终点法 )。高浓度的lp(a)是动脉粥样硬化的独立危险因子。3. 试剂：3.1.临床生

22、化检测试剂的发展历史第一阶段：各医院实验室通常自行配制简单试剂，能开展的生化检测的方法及检测项目十分有限，无统一标准，准确性极差第二阶段：使用时要用多种试剂配制在一起，稳定性很差，多数在冰箱内只能保存数天，并且操作繁琐费时，容易加错试剂第三阶段：冻干试剂、干粉试剂。冻干试剂是先将各种化学试剂溶解混合后，分装成不同试剂的瓶内，再经冻干处理。冻干试剂中残留的含水量不易精确控制，造成瓶间差较大。干粉试剂是用将各种干燥的化学试剂直接混合加工而成， 各瓶内试剂中所含水量均一。冻干和干粉试剂在用前要复溶，复溶时对水质及其加入量要求很高，复溶后保存期短，稳定性差，常常造成浪费，同时不能抗干扰。第四阶段：液体

23、双生化试剂。准确、稳定性好；抗干扰能力强，无需复溶，使用方便，不易浪费，使用前无需准备，可直接上机使用，并适用于手工法。3.2.双试剂的优点双试剂是指将反应体系的全部试剂分成两大组分，即第一试剂先与被检样本中的干扰物质反应，使其被扣除，然后加入第二试剂，样本中的被检物质与反应体系中的试剂起反应，再进行测定。3.2.1.抗干扰反应能力强在临床生化测定过程中，血标本本身成分十分复杂，除了含有待测物质外，还含有各种酶、有机物、无机盐等物质，这些物质都会干扰或参与测试反应，引起非特异性干扰反应。为了克服这种干扰反应，将试剂盒分为两组，在测定过程中， 试剂 1 与标本中的干扰物反应，使其消耗， 再用试剂

24、2 启动真正的测试反应进行测定。3.2.2.增强了工作试剂的稳定性许多酶法测定试剂盒为冷冻干燥试剂，在4保存一般稳定期在1 年以上。但生化培训教材 sh001 简明生化分析临床知识 v1.0 8复溶后的工作试剂的稳定性差，如 alt 测定工作试剂4只能保存一周， ast测定工作试剂4只可保存四天， 而液体双试剂则使稳定性大大延长，如 alt 、ast 测定的液体双试剂在4可稳定一年。液体酶法试剂从配制上解决了这一矛盾：a用户可根据每次标本量按一定比例配制适量工作液，当天配制当天用完这样便可减少试剂损失b如果用户使用的自动生化分析仪有双试剂测定功能，那么，就不必把双试剂混合成工作试剂进行测定，试剂的有效期一年便是工作液的有效期。对于干粉、 片剂型等需复溶的生化试剂，水质的好坏直接影响了复溶后工作液的稳定性和测定重复性。目前除了一些三级医院有自制的试剂级的蒸馏水外，其他医院很难获得符合试剂级要求的水，这就对干粉、 片剂试剂的实际使用造成了一定的影响。目前临床化学检测有许多项目已经开始用酶法进行分析测定，而试剂中许多酶在水溶液中是比较“脆弱”的，许多杂质都会影响酶活力。如：a、 水中 f-会引起某些酶失活b、 水中的重金属离子会影响酶活力c、 水中某些微生物会引起酶失活