什么检测波长淮南市食品药品检验中心：多波长高效液相色谱法同时测定阿咖酚散／胶囊中3种杂质成分

新闻资讯2026-04-23 20:33:29

曹梦欣 什么检测波长淮南市食品药品检验中心：多波长高效液相色谱法同时测定阿咖酚散／胶囊中3种杂质成分_https://www.jmylbn.com_新闻资讯_第1张 ,臧晴晴

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（淮南市食品药品检验中心，安徽淮南 　232000）

DOI：10.3969/j.issn.1008-6145.2024.08.014

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摘 要： 建立高效液相色谱法在不同检测波长处同时测定阿咖酚散/胶囊中3种主要杂质成分水杨酸、对氨基酚、对氯苯乙酰胺的含量。采用Ultimate LP-C18 （150 mm×4.6 mm， 5 µm）色谱柱，进行多波长分析。流动相为磷酸盐缓冲液（0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH值至2.6±0.1）-甲醇（7∶3），水杨酸、对氨基酚、对氯苯乙酰胺检测波长分别为241、263、254 nm，流量为0.9 mL/min，柱温为30 ℃，进样体积为20 µL。3种杂质的质量浓度在各自范围内与色谱峰面积的线性关系良好，相关系数均为0.999 8，定量限为0.03~0.14 µg/mL。样品加标平均回收率为97.7%～102.3%，测定结果的相对标准偏差均小于3.0%（n=6）。该法可用于阿咖酚散/胶囊中3种主要杂质成分的含量测定。
关键词： 多波长； 高效液相色谱法； 阿咖酚散/胶囊； 杂质检测

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阿咖酚散/胶囊作为常用的感冒药，内容物主要为每粒含阿司匹林230 mg、对乙酰氨基酚126 mg、咖啡因30 mg和辅料适量的复方制剂。因其价格便宜在市场上流通广泛，临床上主要用于解热镇痛[1]。由于生产阿咖酚散/胶囊的厂家较多，简单的包装在生产、运输、储存中可能产生降解杂质。目前实施的质量标准有国家食品药品监督管理局国家药品标准WS-10001-(HD-0941)-2002和YBH 01232010，其中，检查项只对阿司匹林的降解产物游离水杨酸进行杂质控制，而对主成分对乙酰氨基酚中可能存在的降解产物对氨基酚、对氯苯乙酰胺未建立限度检查[2‒3]。由于对氨基酚、对氯苯乙酰胺等杂质成分具有遗传毒性、肾毒性等[4‒5]，对人体健康存在一定隐患，且阿咖酚散/胶囊的现行标准对杂质水杨酸的检查方法不同、限度（散剂为2.0%，胶囊剂为3.0%）控制不同。
笔者通过文献研究[6‒14]发现阿咖酚散/胶囊的质量控制不够全面准确、杂质检查方法不一，故建立了多波长高效液相色谱法[15]同时检测阿咖酚散/胶囊中3种主要杂质成分的含量，能够快速准确地进行定量检测，为阿咖酚散/胶囊的杂质控制及质量标准提升提供依据。
高效液相色谱仪：LC-20AT型，日本岛津公司。
紫外分光光度计：UV-2700型，日本岛津公司。
超声波清洗器：KQ-500E型，昆山市超声仪器有限公司。
电子天平：XS205DU型，感量为0.01 mg，瑞士梅特勒-托利多公司。
超低温冷冻储存箱：DW-FL450型，中科美菱低温科技有限公司。
甲醇、乙腈：均为色谱纯，美国默克密理博公司。
磷酸：优级纯，国药集团化学试剂（北京）有限公司。
磷酸二氢钾：分析纯，国药集团化学试剂（北京）有限公司。
阿咖酚散/胶囊：共11批，样品信息及生产厂家见表1。

表1   样品信息及生产厂家Tab. 1   Sample information and manufacturer

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水杨酸、对氨基酚、对氯苯乙酰胺标准品：纯度（质量分数）分别为99.8%、98.2%、100.0%，批号分别为100106-202106、100802-202306、100850-202304，中国食品药品检定研究院。
实验用水：超纯水。
色谱柱：Ultimate LP-C18 柱(150 mm×4.6 mm, 5 µm，美国Welch公司)；柱温：30 ℃；进样体积：20 µL；流动相：A相为磷酸盐缓冲液（取0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液，用磷酸调解pH值至2.6±0.1），B相为甲醇，等度洗脱，流量为0.9 mL/min；液相洗脱方法见表2。

表2   液相洗脱方法Tab. 2   Elution method of HPLC

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1.3.1 混合对照品溶液
在避光条件下分别精密称取水杨酸标准品54.06 mg、对氨基酚标准品8.02 mg、对氯苯乙酰胺标准品4.05 mg，置于同一20 mL棕色量瓶中，加入甲醇适量，振摇使其溶解，并定容至标线，作为混合标准储备液。
精密量取混合标准储备液5 mL，置于同一100 mL棕色容量瓶中，加甲醇稀释并定容至标线，摇匀，作为混合标准溶液。
1.3.2 系列混合标准工作溶液
精密量取混合标准储备液适量，用甲醇稀释成系列混合标准工作溶液，其中水杨酸的质量浓度分别为270.30、135.15、67.58、33.79、16.89、3.38、0.68 µg/mL，对氨基酚的质量浓度分别为40.10、20.05、10.02、5.01、2.51、0.50、0.10 µg/mL，对氯苯乙酰胺质量浓度分别为20.25、10.12、5.06、2.53、1.26、0.25、0.05 µg/mL。
1.3.3 样品溶液
在避光条件下，取《中华人民共和国药典》2020年版四部“通则0115散剂”中“装量差异”项下内容物（10袋共含阿司匹林2 300 mg、对乙酰氨基酚1 260 mg、咖啡因300 mg和辅料适量的复方制剂，批号为230101），混合均匀，精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚100 mg），置于10 mL棕色容量瓶中，加入甲醇适量，超声溶解后，定容至标线，摇匀滤过，作为样品溶液。
1.3.4 加标样品溶液
在避光条件下，取《中华人民共和国药典》2020年版四部“通则0115散剂”中“装量差异”项下内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于对乙酰氨基酚100 mg），置于10 mL棕色容量瓶中（平行取样18份），分别精密加入混合对照品储备液2.0、2.5、3 mL各6份，再加入甲醇，定容至标线，摇匀，滤过。
1.3.5 空白溶液
以甲醇作为空白溶液。所有溶液均在-30°C超低温冷冻储存箱下储存。
取表1中不同生产厂家的11批样品按1.3.3方法制备样品溶液，每批各2份，再按照1.2色谱条件进样测定，利用标准工作曲线外标法计算3种杂质成分的含量，水杨酸含量按阿司匹林标示量的百分比计算，对氨基酚及对氯苯乙酰胺含量按对乙酰氨基酚标示量的百分比计算，得到3种杂质的测得量（质量分数）见表3。

表3   样品杂质含量（质量分数）测定结果Tab. 3   Determination results of impurity content (mass fraction) in the sample ( % )

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注：“-”表示未检测出。


经紫外分光光度计全波长扫描，发现水杨酸、对氨基酚、对氯苯乙酰胺在240～270 nm波长处有最大吸收，经液相色谱进样比较系统适用性参数后选择测定波长分别为241、263、254 nm，各待测成分峰形、响应值和分离度均较好。对比国家食品药品监督管理局国家药品标准WS-10001-(HD-0941)-2002和YBH 01232010中单波长等度检测，结果发现采用多波长法切换检测条件下，各成分系统适用性参数更佳，因此选择多波长法。
分别考察了甲醇、乙醇、水作为溶剂对测定结果的影响。结果发现甲醇作为溶剂时，样品在1 min内超声能够完全溶解，而乙醇、水作为溶剂时样品超声较难溶解。溶解时间长可能会增加阿司匹林水解，导致杂质水杨酸含量增大，因此采用甲醇作为溶剂，结果发现样品峰形等各项色谱参数均符合测定要求。
考察磷酸盐缓冲液在不同pH值下（pH值分别为2.0、2.4、2.6、3.0）与甲醇配制的流动相，发现pH＜2.6时，对氨基酚与对乙酰氨基酚色谱峰重叠，pH=3.0时，水杨酸的稳定性不佳，因此选择磷酸盐缓冲液pH=2.6。考察不同比例的流动相及0.8、0.9、1.0 mL/min的进样流量，结果发现磷酸盐缓冲液-甲醇（7∶3）、流量0.9 mL/min的条件下，各待测成分分离度最佳。通过比较不同柱温下（25、30、35 ℃）混合对照品溶液中各待测物峰面积响应及理论塔板数，结果见表4。

表4   不同柱温下各成分的峰面积及理论塔板数Tab. 4   Sample impurity content determination results

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由表4可知，柱温为30 ℃时各待测成分峰面积及理论塔板数最大，因此选择柱温为30 ℃。
取空白溶液、混合对照品溶液、加标样品溶液、样品溶液按照1.2色谱方法进样，色谱图分别见图1~图4。由图4可知，各成分专属性强，其他原辅料成分不影响各待测物质的含量测定。对氨基酚、水杨酸、对氯苯乙酰胺先后出峰，理论塔板数均大于2 000，分离度均大于2.0。

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图1   空白溶液色谱图Fig. 1   Chromatogram of blank control solution

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图4   样品溶液色谱图Fig. 4   Chromatogram of sample solution

1—对氨基酚；2—水杨酸

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  1—对氨基酚；2—水杨酸；3—对乙酰氨基酚图2　混合对照品溶液色谱图Fig. 2   Chromatogram of mixed standard solution

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  1—对氨基酚；2—水杨酸；3—对乙酰氨基酚图3　加标样品溶液色谱图Fig. 3   Chromatogram of spiked sample solution

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按照1.2色谱方法测定系列混合标准工作溶液。以质量浓度（x）为横坐标，色谱峰面积（y）为纵坐标绘制标准工作曲线，利用加权最小二乘法进行回归运算。以信噪比为10作为各成分的定量限。3种杂质成分的线性范围、线性方程、相关系数及定量限见表5。由表5可知，水杨酸、对氨基酚、对氯苯乙酰胺的质量浓度在各自范围内与色谱峰面积具有良好的线性关系，相关系数均为0.999 8，定量限分别为0.14、0.05、0.03 µg/mL，表明该方法具有较高的灵敏度，适于定量。

表5   线性回归方程及定量限结果Tab. 5   Linear regression equation and quantitative limit results

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取1.3.3中含混合标准储备液2.0 mL的加标样品溶液，于室温条件下分别避光放置0、2、4、6、8 h，在1.2色谱条件下进样测定，记录色谱峰面积并带入线性方程计算各成分的质量浓度，试验结果见表6。由表6可知，样品溶液中杂质水杨酸随阿司匹林降解含量逐渐增加；对氨基酚在4 h内较为稳定，超过4 h后含量逐渐降低；对氯苯乙酰胺在8 h内稳定，测定结果的相对标准偏差小于3.0%，因此样品测定时应临用现配，配制时间控制在2 h以内并立刻进样。

表6   稳定性试验结果Tab. 6   Stability test results

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在避光条件下，选取已知浓度的加标样品溶液，按照1.2色谱方法进样并测定，记录色谱峰面积，计算加标回收率及测定结果的相对标准偏差，试验结果见表7。由表7可知，水杨酸加标平均回收率为99.9%~102.3%，对氨基酚的加标平均回收率为97.7%~100.8%，对氯苯乙酰胺的加标平均回收率为98.1%~100.7%，测定结果的相对标准偏差均小于3.0%，表明该方法具有较高的准确度和良好的精密度，能够满足实际检测的需要。

表7   样品加标回收试验结果Tab. 7   Sample addition recovery test results

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以紫外光谱扫描的最大吸收波长为参照，采用多波长高效液相色谱法同时检测阿咖酚散/胶囊中可能存在危害人体健康的3种主要杂质。该方法灵敏度高、稳定性好，对阿咖酚散/胶囊杂质控制方面的不足加以补充，可为阿咖酚散/胶囊质量控制标准提升提供技术参考。
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（Huainan Municipal Food and Drug Inspection Center, Huainan　232000, China）

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Abstract: A high performance liquid chromatography (HPLC) method was established for the simultaneous determination of salicylic acid, p-aminophenol and p-chlorophenamide in Akafen powder/capsule at different detection wavelengths. Ultimate LP-C18 (150 mm×4.6 mm, 5 µm) column were used for multi-wavelength analysis. The mobile phase was phosphate buffer (0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution with pH of 2.6±0.1 adjusted by phosphoric acid) -methanol (7∶3). The detection wavelengths of salicylic acid, p-aminophenol and p-chlorophenamide were 241, 263, 254 nm, respectively. The flow rate was 0.9 mL/min, the column temperature was 30 ℃, and the sample volume was 20 µL. The mass concentrations of the three impurities havd good linear relationships with the chromatographic peak areas within their respective ranges, the correlation coefficients are all 0.999 8, and the quantification limits were 0.03-0.14 µ g/mL. The average recoveries of the sample spiked were 97.7%-102.3% . Relative standard deviation of sample determination results were less than 3.0%(n=6). The results indicated that the multi-wavelength HPLC method can be used for the determination of three main impurities in Akafen powder/capsule.
Keywords: multi-wavelength；HPLC；akafen powder/capsule；impurity detection

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引用本文： 曹梦欣，臧晴晴 . 多波长高效液相色谱法同时测定阿咖酚散/胶囊中3种杂质成分［J］. 化学分析计量，2024，33（8）：79. (CAO Mengxin, ZANG Qingqing. Simultaneous determination of three impurity components in Akafen powder/capsule by multi-wavelength high performance liquid chromatography[J]. Chemical Analysis and Meterage, 2024, 33(8): 79.)

通讯作者：曹梦欣，硕士研究生，主管药师，主要从事化学药品分析和药物分析

中图分类号： O657.7

文章编号：1008-6145(2024)08-0079-05

文献标识码： A

收稿日期：2024-07-04

出版日期：2024-08-20

网刊发布日期：2024-08-23

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