取 材

    切取的组织块厚薄要均匀，一般厚度以 0.2-0.3cm 为适，脂肪组织、肺组织、纤维性肿瘤、平滑肌瘤应取薄一些；淋巴结应修掉两侧球冠，并尽量剔除周围的脂肪组织。在切取纤维组织、肌肉组织、胃肠道时，应注意纤维及肌肉的走向，取材时尽可能按与纤维平行走向切取为佳。小标本需点伊红，骨和钙化组织要脱钙处理。避免取到缝线或缝钉。

固 定

    所有组织一旦离体，必须及时固定，大器官应及时切开固定，大标本取材后固定时间需要6-12个小时，小标本一般需要6个小时。

脱 水

    脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来。75-80%浓度的酒精具有极强的穿透力，在短时间内可以置换出大量的水份，而高浓度酒精容易使蛋白质凝固，在组织的表面形成一层硬壳，使酒精难以渗透到组织块中间去，导致组织脱水不佳。

    大小标本应该分开脱水。否则小标本会变硬，切片容易产生裂痕。

大标本脱水程序：

小标本脱水程序：

    在更换脱水液时，至少要更换最后2缸无水乙醇，以保证脱水的效果。2缸5L的无水乙醇能处理2000个组织块。

透 明

    为了使石蜡能够浸入到组织块内，必须经过一种既能与脱水剂混合，又能与石蜡相溶的媒介物质，这个过程称透明。具体程序见上图。5L的凌泉脱蜡液（即环保透明剂）能处理2000个组织块。

浸 蜡

    组织透明后，在熔化的石蜡内浸渍的过程称为浸蜡。浸蜡用的石蜡熔点应该在56-58℃左右，程序同上。

包 埋

    最常用的是石蜡包埋法。包埋的关键：一是平整，二是方位。要求在包埋时，应采用镊子轻压组织块拱起部分，使之平贴于底部，通常采用组织的最大面包埋。囊壁、管腔组织应竖直包埋。蜡块上下应留有余蜡。包埋时还应注意有无缝线，纸条，如有一定要去除。宫颈活检、胃肠活检标本不能按一般的规律取最大包埋面，应分清组织层次包埋。

切 片

    切片的第一步是粗切。粗切的前进厚度大约在15-30μm左右，质地较硬的组织或较小的组织，粗切的前进厚度应再小一些，粗切至组织最大面暴露后，才进行细切。切片时要求用力均匀、柔和，摇速不可过快或过慢。切片厚度一般为2-4μm。切片要求平整、薄、均匀。在切片时，应注意组织包埋的方向。纤维、肌肉等的走向应与切片刀平行，较难切的部分应放在上面，如皮肤的表皮，肿块的包膜，胃肠道的浆膜等。

    胃肠镜及穿刺小标本连续切片≥6个；淋巴结切片时用手指触摸稍加温以免切片时过脆。

    下面是切片时碰到的问题及原因、处理方法：(1）组织发脆。切片厚度设置为2微米，边切边用嘴向蜡片吹气，可能会好些。(2）切片卷起。可能是刀不锋利，或刀角度过大，切片过厚等。(3）厚薄不均。可能是刀、刀座或蜡块未夹紧、组织太硬，或切片机主轴太向前，或切片机己磨损。（4）切片出现大的裂痕。可能是刀有缺口，石蜡内有杂质，组织内有钙化，或有线结，也可能会有棉纸纤维等。(5）切片后蜡块内陷，是因为组织脱水不佳。

展片与捞片

    展片水温主要和包埋石蜡的熔点有关，一般在42-45℃。水温过高，会引起组织细胞散开，水温过低，切片皱摺无法摊平。捞片时水要干净，要捞那些完整、无皱摺的切片，粘贴于玻片中1/3和下1/3的中间。

烤片和脱蜡

    一般在60-70℃的温箱内烤片0.5-1小时左右，温度过高，会引起细胞收缩；时间过短（少于20分钟）容易造成脱片。脱蜡也相当重要，如果脱蜡不干净，切片不易着色或着色不均匀。3缸330毫升的凌泉脱蜡液能处理1500张石蜡切片（厚度为4μm）。切片从温箱拿出后要立即放入脱蜡液中脱蜡。

染 色

    苏木素染色时间要根据染料的新旧、温度而定，一般为5-15分钟，经水洗后，用0.25%盐酸酒精分化，并充分水洗，以防盐酸残留导致切片褪色。最后放入伊红复染（20-40秒)。染色理想的切片在显微镜下应是：细胞核与细胞浆对比明显，核膜及核染色质颗粒清晰。

脱水和封片

    浓度低的酒精比浓度高的酒精更容易脱水，也容易使切片褪色，故脱水时间可短一点，浓度低的酒精每道半分钟，纯酒精每道1分钟。切片经透明剂透明后，用中性树胶封固。为增加切片的透明度，防止细胞收缩或切片出现黑色结晶样小点，切片应该湿封，严禁烤干或吹干后干封。脱水剂的更换也应量化，一般是每500ml脱水剂处理500张切片后更换一次为宜。中性树胶不能过稀，封片时树胶要均匀充满盖玻片且不外溢为佳，不能有气泡。

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1. 脱脂效果。脱脂干净，切片完整。

下方为脂肪组织（厚度为2毫米）使用乙醇和凌泉脱蜡液处理前后的对比照片（具体程序见后文）：

脂肪切片完整：

2. 脱蜡效果。脱蜡干净，优于其它同类产品。

凌泉脱蜡液在下方视频中的左侧，右侧为其它品牌，石蜡切片厚度为4微米。

3. 透明效果。可以看清多层重叠的细胞：

4. 组织块处理数量（用于脱水机）。5L的凌泉脱蜡液能处理2000个组织块。

5. 石蜡切片处理数量（用于染色机）。3缸330毫升的凌泉脱蜡液能处理1500张石蜡切片（厚度为4微米）。

6. 气味。在同类产品中气味最小。

7. 价格。在同类产品中价格最低。

8. 售后。定期回访，根据实际情况为客户提供最合适的解决方案，如该案例：过夜的脱水程序，导致内镜活检组织的切片总是有裂痕。

1. 封片前透明（不是必选项）。

组织切片或细胞涂片经过无水乙醇脱水之后，再过两缸脱蜡液，每缸2分钟，然后在湿润的状态下封片。

建议选择凌泉脱蜡液，以免出现浑浊。

2. 如果使用玻璃瓶装的封片胶，请将它倒入新滴瓶。请不要将它倒入旧滴瓶(残留其它品牌的封片胶)，因为它与其它品牌封片胶不相溶，会产生沉淀。

3. 滴加封片胶。建议使用针管瓶，针管瓶的液滴大小与小盖玻片更匹配。

如果使用针管瓶，小盖玻片滴1滴，大盖玻片滴2滴。

4. 当使用普通滴管时，每张载玻片只滴1滴（不论盖玻片多大）。

封片胶滴加超过1滴，会导致多张切片粘连。

5. 封片：让盖玻片的下缘贴近载玻片的下缘，然后放开盖玻片的上缘。

6. 在自然晾干的情况下，封片5天后，封片胶就会干燥。