神经母细胞瘤（NB）是一种常见的颅外实体肿瘤，起源于神经嵴（NC），占所有儿童癌症死亡人数的15%。神经母细胞瘤患者的特点是极端的异质性，从自发性消失到恶性进展。超过一半的新诊断患者表现出高度转移性肿瘤，多达20%的高危患者在诱导化疗期间患有难治性或进行性残留疾病。尽管大多数高风险患者实现了缓解，但其中大部分患者存在微小残留病灶（MRD），即使在额外的巩固治疗后也会导致复发。

图1 MRD的动态

由于残留肿瘤的可用性有限，PB和BM已被用于分离和分析CTC和DTC，以评估癌症患者的MRD。此外，最近的技术进步使利用循环肿瘤DNA（ctDNA）进行MRD评估成为可能。我们总结了癌症MRD的生物学和检测方法，并评价了神经母细胞瘤MRD的可用检测方法和临床意义，以阐述其在神经母细胞瘤患者中的动态。

NB起源于短暂的神经嵴（NC）细胞群，特别是致力于建立交感神经肾上腺组织的NC细胞亚群。上皮-间充质转化（EMT）是NC细胞迁移启动的核心，并赋予神经母细胞瘤细胞侵袭性表型：增加肿瘤起始和转移潜力以及更大的耐药性。

图2 神经母细胞瘤中的MRD

鉴于传统形态的局限性，借助单细胞免疫细胞学（IC）和流式细胞仪（FCM）用于检测BM、PB和外周血干细胞（PBSC）样本中的残留神经母细胞瘤细胞。

尽管通过IC检测和定量肿瘤细胞的可靠性存在一定争议，但是对神经母细胞瘤细胞的IC检测进行了标准化—利用骨髓涂片和抗-GD2抗体进行检测，此检测方法同时被国际神经母细胞瘤风险组织（INRG）推荐用于BN、PB和PBSC样本的单细胞敏感MRD检测。

FCM在转移性神经母细胞瘤患者的初诊BM样本中检测NB84+/CD56+/CD45-细胞，预测累积存活率显著较差。FMC在BM中患有GD2+/CD81+/CD56+/CD45-细胞的神经母细胞瘤患者无事件生存率明显较差，复发/进展的累积发生率增加。

图3 MRD检测方法

表1神经母细胞瘤MRD检测方法的比较

一些神经母细胞瘤相关mRNA最初被确定为单个标记（表2）以及后来作为一组多个标记（表3）用于神经母细胞瘤患者基于qPCR的MRD检测。

表2神经母细胞瘤相关的mRNA

表3 神经母细胞瘤相关的mRNAs组

在过去的二十年里，有越来越多的报道使用不同方法（MRD标记）和样本进行基于qPCR的MRD检测分析。这些检测使用三种类型的样品（BM、PB和PBSC）。基于qPCR的MRD检测方法可以分为以下五组：

（1）局限性神经母细胞瘤-PB样本;

（2）局限性神经母细胞瘤-BM样本;

（3）转移性神经母细胞瘤-PBSC样本;

（4）转移性神经母细胞瘤-PB样本;

（5）转移性神经母细胞瘤-BM样本。

目前，所有五组的临床意义仍有待确定。在转移性神经母细胞瘤- PB和BM样本中报道了有希望的数据，但数据仍然存在争议。

荷兰阿姆斯特丹大学实验免疫血液科Lieke Van Zogchel教授在第54届国际儿科肿瘤学会（SIOP）会议中分享了关于高危NB患者MRD的检测与预后生存相关的研究。

该研究纳入了345例高危NB患者（2009-2017年），使用德国儿科肿瘤学小组（GPOH）2004方案和荷兰儿童肿瘤小组（DCOG）2009方案进行治疗。Zogchel教授团队通过qPCR检测PHOX2B、TH、DDC、CHRNA3和GAP43五个NB特异性mRNA，将qPCR结果与BM IC结果进行比较。以年龄和MYCN扩增为危险因素，研究骨髓浸润水平与无事件生存期（EFS）和总生存期（OS）之间的关系。

诊断时骨髓MRD：qPCR检测出骨髓浸润＞10%是评价高危NB患者远期生存的预后指标，EFS和OS调整后风险比（HR）分别为1.82和2.04。

2个疗程后骨髓MRD：骨髓浸润＞1%是评价高危NB患者远期生存的预后指标，EFS和OS调整后风险比（HR）分别为1.79和2.39。

诱导治疗结束时骨髓MRD：诱导后BM阳性患者预后较差。qPCR阳性患者的5年无事件生存率和总生存率分别为27%和44%，而qPCR阴性患者为60%和66%（P＜0.0001）。

多变量Cox回归模型显示，诱导治疗结束时，qPCR阳性与EFS和OS相关，风险比分别为2.10和1.76。而免疫细胞学阳性与EFS或OS无关。

在不同的治疗阶段，高危NB患者的骨髓浸润水平与EFS和OS之间均存在强相关性。诱导治疗后通过qPCR检出BM阳性患者与较差的生存率显著相关，并可识别有复发风险的患者。

- END -