脱氧核苷酸 22 酵母菌 抗菌肽能够杀灭细菌（不能杀灭酵母菌） 含无机氮源 布康唑 浓度 不同培养时期

【解析】

基因工程的操作步骤：获取目的基因（基因文库获取、PCR扩增、人工合成）；构建基因表达载体（含目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点）；把目的基因导入受体细胞（动物细胞—常用显微注射法，植物细胞常用农杆菌转化法，微生物细胞常用钙离子处理法）；目的基因的检测与鉴定（DNA分子杂交、分子杂交、抗原抗体杂交及个体水平的检测等）。

（1）质粒的化学本质是原核生物细胞质中小型环状的DNA分子，故质粒PLG339的基本单位是脱氧核苷酸。

（2）若PLG339-nABP经限制酶AccⅢ处理后，产生66bp和4140bp两种长度的DNA片段，根据题干知，编码抗菌肽（ABP）序列的基因按照首尾相连的方式插在质粒PLG339的布康唑抗性基因内部，故切割后66bp的应为目的基因片段，目的基因是编码蛋白质的序列，转录形成66个碱基的mRNA，mRNA上三个相邻的碱基编码一个氨基酸，故单个抗菌肽（ABP）最多由66÷3=22个氨基酸。

（3）根据题干：抗菌肽具有热稳定性以及广谱抗细菌等特点，抗菌肽能够杀灭细菌（不能杀灭酵母菌），故应选用酵母菌作为导入PLG339-nABP的受体细胞。

（4）由于基因trpA的表达产物可使细胞利用无机氮源合成色氨酸，故进行筛选时根据可以先在含无机氮源，不含色氨酸的固体培养基上培养，受体细胞为trpA基因缺陷型，能生长的受体细胞即导入了质粒，但不一定是重组质粒，还需要进行第二步筛选；由于目的基因编码抗菌肽（ABP）序列插入到布康唑抗性基因内部，故导入重组质粒的受体细胞不抗布康唑，将第一步所得菌落转移到新的培养基上进行培养，该培养基中添加布康唑，导入重组质粒的应在第一步培养基上能生长，而不能在第二步培养基上生长的菌落。

（5）据图分析可知：转基因表达产物ABP对金黄色葡萄球菌的杀菌效果与之前的透明圈相比，比值越小抑菌效果越好，比值不同可能与图中浸的ABP浓度不同有关，培养不同天数抑菌效果不同，故还与不同培养时期有关。