液基制片效果差，做出来的液基制片还不如传统涂片好看。•

液基制片效果好，做出来的液基制片比传统涂片难判读。•

制片的不会看片，看片的不关注制片。标本种类制片问题判读问题痰粘液多阳性率低尿液细胞量少阳性率低，病变细胞级别难判断胸腹水血性样本细胞形态与传统对比改变明显支刷小块组织多拥挤成团的细胞不好判断灌洗液细胞量少大量吞噬细胞穿刺背景去除太干净缺少背景的支持（4）（5）液基制片技术——（痰）（6）•

推荐：•

样本收集：痰液基细胞学保存瓶。•

前期处理：振荡器；专用过滤器；纱布。•

试剂：粘液稀释液；FULUKA；DTT。•

染色：巴氏染色，染色参数同妇科制片。（痰液基细胞保存瓶）•

优点：•

1.痰标本直接吐入保存瓶，细胞

形态保存完好。•

2.痰标本密闭保存，干净环保。•

3.样本存储运输方便，可以长时

间保留（一个月）。

•

4.便于后期的标准化操作。（7）（8）•

痰液基制片中的关键环节是能否有效去除样本中的粘液。•

操作步骤：•

1.加入去除粘液的试剂。•

2.将样本振荡30分钟，

10到15分钟的时候需要

观察粘液稀释情况。•

3.用过滤器或者纱布过滤稀释好的痰样本。（10）LBP痰液基细胞学制片简介•

前期处理：固定→消化黏液→过滤黏液丝→清洗→两次离心收集细胞成分。•

机器制片：LBP全自动制片染色机进行（11）•

固定（能同时破坏红细胞）•

消化粘液（视标本黏液多少

程度，加入约4.5毫升黏液稀

释液）•

充分震荡30分钟，保证黏液消化完全•过滤黏液丝，转移样本

：将样本瓶、注射移液

器，套有LBP专用过滤器

的离心管管放入标本架

上；通过样本转移机转

移样本。（12）•

两次离心，清洗，收集细胞：

把离心管平衡放进离心机，

第一次离心：600G

10分钟

清液弃掉

加入5ml缓冲液（清洗细胞）第二次离心：600G5分钟

将上清液弃掉，充分震荡（13）（14）•

制片染色：

铺好玻片，拧上染色仓，将处理好的标本放入LBP全自动制片染色机。设定好染色参数，机器自动完成制片染色。（15）•

痰液基制片操作小技巧：◆

加入粘液稀释液15分钟后，如果持续振荡效果欠佳，可以用手拿着保存瓶使劲晃荡几下。◆

消化30分钟后难以溶解的粘液，可以用吸管吸出。◆

离心后细胞量过多的离心管倾倒上清液，需要单独拿出来倾倒，避免成团的细胞丢失。◆

上机器制片前，细胞量过多时，可以先加入适量次缓冲液用于稀释。（16）（17）（18）•

痰标本镜下判读：•

1.掌握鳞与腺的常形。•

2.随时想着小细胞癌。•

3.评价样本的满意度。（19）（20）（21）（22）（23）（24）（25）（26）（28）液基制片技术——（尿）（29）•

尿液基细胞学制片，就是围绕着细胞量少的问题从各方面解决。•

尿液基细胞学诊断，就是保证高级别病变能够准确识别。（30）（尿液基细胞保存瓶及尿杯）•

优点：•

1.大尿杯方便取样，保存瓶可以收集200毫升样本。•

2.保存瓶中的保存液，能较好维持细胞的正常形态。•

3.样本便于存放，送检。（31）•

尿液标本的取材注意事项：•

细胞学检查主要面向老年（男性）筛查及血尿查因。•

晨尿样本细胞褪变明显，住院病人避免留取晨尿。•

留取中段尿，否则外阴或尿道口的上皮易造成细胞量丰富的假象。•

申请单要注明样本来源及有意义的病史。（36）•

尿液基制片操作小技巧：◆

保存瓶放置冰箱先静置1小时以上，制片时倒去上面1/2至1/3样本，将剩余的标本离心收集。◆

用50毫升离心管离心，一次离心后观察管底，如果肉眼看不到细胞，去掉上清再次加入样本离心。◆

离心完成倾倒上清液一次成型，少量残留的液体不会影响制片，反而便于后续的振荡充分。◆

上机器制片时标记样本量少的标本，将离心管中的细胞全部倒入制片染色仓。（37）（37）（38）（39）•

尿液标本镜下判读：•

1.正确评估细胞量。•

2.成团细胞的判断要注意样本来源和结石病史。•

3.高级别病变的诊断要点类似宫颈细胞学的HSIL。（40）（41）（42）（43）（45）液基制片技术——（胸腹水）•

关键:血性标本如何做出满意的液基制片？•

交流：胸腹水液基细胞学只是一个平台，在此基

础上的细胞（细胞块）IHC,FISH等技术的应用，

有着更为广阔的前景。（47）血性样本的处理•

胸腹水液基制片中，血性样本，特别是深红，暗红色的样本的处理，对制片效果的影响尤为明显。•

血性样本用于制片的量以15到30毫升为宜。•

制片成功的关键在于是否有效提取到中间层的细胞。•

离心力的大小比离心时间的长短要重要得多。（48）•

高速离心能使样本中的细胞很好层次，

一般要求离心力达到600G以上，离心时

间5-10分钟。•

中间层次的细胞为肿瘤细胞与炎症细胞的聚集区域。•

中间层不明显时，操作手法是关键。血性标（

本

49）

底层血性标（

本

50）

中层（51）血性标本交界层（52）吸除法•

吸取中间层细胞操作手法（1）⑴先用吸管将上清液吸干净⑵捏紧吸管，从交界面中心位置按

照同一方向，缓慢吸取中间层细

胞。高度约2到3毫米，量约0.5至

1毫升。⑶将吸取物转移到小离心管（12毫升）。⑷加入细胞保存液。•

吸取中间层细胞操作手法（2）

⑴捏紧吸管（最好选用3毫升吸

管），直接抵达上清液与红细胞

层的交界处。⑵从交界面中心位置按照同一方向，

缓慢吸取中间层细胞。高度约2

到3毫米，量约0.5至1毫升。⑶将吸取物转移到小离心管（12

毫升）。⑷加入细胞保存液。

（53）离心后细胞沉淀到达这个位置，若是血性标本最好用软吸管吸去上清液，再进行吸取中间层细胞

离心后细胞沉淀到达这个

位置，不管是血性还是非

血性标本都可以直接倾去

上清液，不需要吸取中间

层。

5412毫升离心管吸取中间层的经验值

离心后细胞沉淀到

达这个位置时，若是血性标本一定要用软吸管吸取上清液，再进行吸取中间层细胞（55）56倾倒法•

根据离心后细胞团的大小，倾倒上清液。•

1.小团（不超过3毫米高度），快速倾倒上清液，然后在漩涡震荡器上轻微震荡，提取有效细胞成分。•

2.大团（通常大于5毫米高度），缓慢倾倒上清液，然后用1毫升吸管吸取管壁上的有效细胞成分。血液多的样本血液少的样本•

胸腹水液基细胞学镜下诊断：•

1.液基制片的细胞大小与传统涂片差异明显。•

2.液基制片能更清晰的显示细胞的细微结构以及大多数肿瘤细胞团的三维立体结构，有利于诊断。•

3.恶性肿瘤的进一步鉴别，形态学上难以把握。•

4.液基制片处理过的样本，可以用于细胞白片及细胞蜡块的制备，多种检测技术可以应用于辅助诊断，鉴别诊断，判断预后及靶向治疗。（64）•

胸腹水恶性肿瘤细胞的鉴别要点：•

1.大核仁（常＞5um）•

2.大的空泡•

3.不规则的核膜，粗糙的核染色质•

4.特殊的团结构•

5.病理性核分裂像（65）（66）（67）（68）（69）（70）胸腹水细胞块技术（传统方法的改良）•

1.小管•

2.圆底胸腹水细胞块技术（新技术设计）（73）病例分享（74）CK7(+)（75）ALK断裂（一）（76）EGFR扩增（一）（77）液基制片技术——（支气管镜刷检）ALK断裂（一）•

推荐：•

支刷液基细胞学项目值得开展。•

强烈建议使用巴氏染色。•

细胞免疫组织化学。（78）•

支刷样本如果用传统涂片的方法，细胞褪变明显，核的信息大量丢失。•

液基细胞学技术对于支刷样本制片效果的改善提高明显，尤其对于小细胞癌的判读异常准确。•

支刷样本建议采用巴氏染色，有助于区分细胞来源，显示细微结构；对于某些鳞癌病变，巴氏染色提供确凿的诊断依据。（79）（80）•

液基制片最大的优点就是支刷的样本能够在离体后第一时间将细胞涮入到保存液中，细胞形态保存完好，给明确诊断带来很大帮助。•

支刷样本制片注意事项：•

◆

支纤镜刷取的样本如果要做传统涂片对照，刷片不要超过2张。•

◆

样本中如果含有小的血凝块或者组织碎片，需去除。•

◆

倾倒上清液一次成型，避免细胞丢失。（81）•

支刷液基镜下判读：•

1.

找准纤毛柱状上皮这边尺子，比对着认细胞。•

2.

非小细胞肺癌鳞癌与腺癌的鉴别很难，细胞免疫组化有助鉴别。•

3.小细胞癌的特点非常明显，通常形态学就可以准确判读。（82）（83）（84）（85）病例分享病例分享TTF-1(+)（93）液基制片技术——（各种影响因素）•

干封（不过二甲苯）：对于成熟的鳞状上皮影响较小，但是对于底层的鳞状上皮及腺细胞，间皮细胞影响很多；对于单个散在的细胞影响较小，对于成团的细胞影响很大。（94）（95）（96）•

干燥（封片前在空气中暴露时间过久）：表层鳞状上皮出现褐色物质。（97）98（99）•

酒精不纯或湿度大：影响胞浆上色，片子整体呈现绿色或者灰色。（100）（101）（102）•

封片胶：多种环保胶都会影响液基制片的最终效果，比如褪色，模