秦丹丹　万圣云　丁洋　詹焱青

[摘要] 意图 树立一个安稳的血管外膜剥离出血的动物模型，用于临床进一步研讨部分止血药物的作用。 办法 取健康新西兰大白兔12只，随机按胶原酶浓度分为1 g/L、2 g/L、4 g/L三组，胶原酶消化兔颈动脉至动脉外膜疏松，眼科镊钝性剥离外膜，在剥离过程中呈现血管渗血，调查比照不同浓度胶原酶消化后动脉出血量的改变，并取消化前后的颈动脉行HE染色，光镜下调查外膜剥离程度，以断定胶原酶最佳消化浓度及剥离程度。 成果 1g/L的胶原酶消化动脉外膜不完全，无法构成动脉安稳的出血，4 g/L的胶原酶导致血管消化过度决裂出血，2 g/L的胶原酶消化血管外膜+眼科镊钝性剥离可使血管外膜剥离完全，血管出血安稳。 定论 胶原酶消化+眼科镊钝性剥离血管外膜的办法可树立安稳的血管出血模型，其最佳消化浓度为2 g/L。

[关键词] 胶原酶；兔颈动脉；外膜剥离；血管出血模型

[中图分类号] R-332 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）08-0001-03

现在临床上部分止血药物较多[1，2]，作用纷歧，临床上对止血药物作用的点评缺少一种抱负的出血模型，Kunio等[3]、Rall等[4]选用外科手术直接损害动脉，导致血管决裂，呈现不行操控的出血，牟华明等[5]曾选用刀片刮除的办法去除兔颈动脉外膜，但试验中发现刀片刮除外膜对血管牵张作用强，导致血管壁决裂出血，无法计量计算。本研讨即测验树立一个安稳的出血模型，用以对临床上使用的部分止血药物作用进行点评，以辅导临床实践。

1 材料与办法

1.1 一般材料

健康新西兰大白兔12只，男女参半，体重2.5～3.0 kg（由安徽医科大学试验动物中心供给），试验动物凝血功用正常，活动不受约束，自在饮水，单笼惯例喂食。试剂器件：Ⅱ型胶原酶（美国Sigma公司），眼科镊，电子天平，白腊切片机，材料来历、层次相同的10 mm×6 mm干纱条若干。

1.2办法

1.2.1试验分组 选用随机数字表法将试验动物分为三组：1g/L胶原酶组、2 g/L胶原酶组、4 g/L胶原酶组，每组各4只。

1.2.2动物模型树立 取3%戊巴比妥钠1 mL/kg 沿兔耳缘静脉静推麻醉动物。麻醉满足后，动物取仰卧位，头部及四肢固定于手术台上。颈前脱毛后惯例碘酒、酒精消毒3遍，铺洞巾，纵行切开皮肤，逐层别离颈部筋膜及肌肉，露出双侧颈动脉鞘，细心游离出双侧颈动脉，长约25 mm，用长25 mm、宽15 mm的胶皮片放置于颈动脉下端，离隔颈动脉和周围安排，用干纱条敏捷擦净周围渗出液，选用不同浓度Ⅱ型胶原酶浸湿的纱条外敷左边颈总动脉，共10 min，生理盐水冲刷、间断消化，用眼科镊剥离外膜白色疏松安排，直至白色疏松安排消失。用干纱条敏捷擦净周围渗出液，然后将称重好的干纱条包裹颈动脉，称重三组出血60 s的出血量，敏捷用生理盐水冲刷、干纱条擦净后，再次称重三组出血60 s的出血量，重复3次，并计算出血量。另一侧颈动脉不予胶原酶消化处理，仅放置长25 mm、宽15 mm的胶皮片于颈动脉下端，敏捷用干纱条擦净周围渗出液，相同办法放置干纱条称重3次出血60 s的出血量，作为阴性对照侧。

1.2.3选材及固定 称重完毕后当即取出双侧颈动脉，标本截取3段，敏捷浸泡于4%多聚甲醛液中固定24 h以上，白腊包埋固定切片。

1.3安排形态学调查

标本白腊包埋后切片，切片按惯例进行HE染色，高倍显微镜下调查外膜剥离作用及内膜的病理改变。

1.4 计算学处理

选用SPSS 13.0计算学软件进行数据剖析，计量材料（60 s安排出血量）用（x±s）表明，1 g/L浓度的胶原酶试验侧与阴性对照侧、2 g/L浓度的胶原酶试验侧与阴性对照侧间60 s安排出血量的比较均选用独立样本t查验，P<0.05为差异有计算学含义。

2 成果

2.1血管外膜成功剥离

正常兔颈动脉结构分为内膜、中膜及外膜，见图1A。2 g/L胶原酶消化+眼科镊剥离可达到外膜根本剥离的作用。HE染色下可见血管外膜结缔安排根本剥离，平滑肌层露出于最外层，见图1B。而1 g/L组血管外膜剥离不完全HE染色下可见仍残留部分结缔安排，见图1 C；4 g/L组血管外膜剥离完全，血管决裂，无法选材。

2.2 眼科镊刮剥血管外膜至血管广泛出血

正常兔颈动脉外膜安排学结构首要包含外弹力层、滋补血管、神经末梢及周围疏松结缔安排，如图2所示。经胶原酶消化后，血管外膜结缔安排显着疏松，易用眼科镊锐性剥离外膜结缔安排，在刮剥的过程中，因外膜结缔安排消失，使外膜滋补血管广泛露出损害，终究血管出血，见图3。

2.3不同浓度胶原酶对血管外膜消化程度影响

1g/L的胶原酶消化动脉外膜不完全，无法构成动脉安稳出血，1 g/L试验侧60 s出血量与阴性对照侧比较，差异无计算学含义（P>0.05），考虑为安排损害后炎性渗出。2 g/L试验侧胶原酶消化+钝性剥离血管外膜构成的出血安稳，血管外膜根本剥离，见图1B，未予任何处理后，出血不能自止，该组试验侧出血量显着高于阴性对照侧，差异有计算学含义（P<0.05）。4 g/L组试验组60 s出血量大，出血量已超越纱条吸附液体量，无法进行定量计算，且试验动物敏捷逝世。见表1。

3 评论

外科手术中，术中出血不行避免，但是削减出血量，缩短手术时刻，对手术预后有重要影响，而部分止血药的使用在其间起重要作用。现在部分止血药物品种繁复，缺少一种抱负的部分出血模型来点评部分止血药物的作用。

相关文献[5-8]报导，动脉壁是一个有序的层状结构，分为内膜、中膜及外膜。外膜安排学结构首要包含外弹力层、滋补血管、神经末梢及周围疏松结缔安排。血管结缔安排内包含胶原、弹性蛋白和多种安排细胞（巨噬细胞、成纤维细胞等）。血管外膜具有丰厚的滋补血管，首要存在于大动脉的外膜，起养分血管外膜的作用。血管外膜的滋补血管分为外部滋补血管、内部滋补血管以及静脉滋补血管。血管外膜首要构成了血管的支撑结构和供给滋补血管的作用，全程参加了血管损害与修正的全过程。

Kunio等[3]、Rall等[4]选用单纯的外科手术锐性损害血管导致血管出血。该手术办法难度较大，因为器械直接损害血管全层，操作过程中易导致动脉瘤构成、血管直接决裂，呈现不行操控出血。国内牟华明等[5]也曾测验选用刀片刮除的办法去除血管外膜，因为刀片刮除外膜对血管牵张作用强，易刮伤血管壁构成机械损害、出血。在预试验的过程中，研讨发现器械直接锐性刮剥血管易导致血管决裂、出血敏捷、出血量大、无法定量测定、试验动物敏捷逝世。

汤月霞等[9]、胡长途等[10]选用胶原酶消化血管外膜办法，发现胶原酶消化血管外膜30 min后，血管外膜变为白色，HE染色下发现外膜较消化前显着疏松，简单用器械钝性剥离。剥离至外膜白色疏松安排消失的程度，HE染色下发现外膜根本剥离洁净。

本试验选用胶原酶消化+眼科镊剥离血管外膜办法，使血管结构损坏，导致血管出血。考虑到试验的操作性、试验数据的量化，咱们选取了供血丰厚、分支较少、方位相对表浅易露出的兔颈动脉，在预试验过程中发现兔颈动脉较腹主动脉、股动脉等大动脉便于操作，露出充沛，对周围安排影响小，出血量可达满足作用。

1g/L浓度组试验侧60 s渗出量与阴性对照侧相差不大，经过HE染色发现，血管外膜仍残留部分结缔安排，外膜滋补血管未露出，提示1g/L浓度胶原酶消化血管外膜不完全，经眼科镊钝性剥离后，血管无显着出血。2 g/L胶原酶组试验侧60 s渗出量与阴性对照侧有显着差异，HE染色发现，血管外膜结缔安排剥离完全，外膜滋补血管广泛露出，内膜及中膜无损坏，提示2 g/L胶原酶消化外膜完全，经眼科镊钝性剥离后，外膜滋补血管广泛出血，出血量安稳，且有计算学含义。4 g/L浓度组60 s出血量已超越纱条吸附液体量，且血管决裂，试验动物敏捷逝世，提示4 g/L胶原酶消化外膜过度。

综上所述，2 g/L胶原酶消化+眼科镊钝性剥离血管外膜可导致外膜滋补血管广泛损坏，而血管中膜及内膜结构未损坏，出血量及出血速度安稳，试验操作可重复性及操作性好，因而能够成为一种点评部分止血药物作用的安稳、抱负的出血模型。

[参考文献]

[1] Vuceli D，Pesko P，Stojakov D，et al. Systemic hemostatic drugs[J]. Acta Chirurgica Iugoslavia，2007，54（1）：177-195.

Kunio等[3]、Rall等[4]选用单纯的外科手术锐性损害血管导致血管出血。该手术办法难度较大，因为器械直接损害血管全层，操作过程中易导致动脉瘤构成、血管直接决裂，呈现不行操控出血。国内牟华明等[5]也曾测验选用刀片刮除的办法去除血管外膜，因为刀片刮除外膜对血管牵张作用强，易刮伤血管壁构成机械损害、出血。在预试验的过程中，研讨发现器械直接锐性刮剥血管易导致血管决裂、出血敏捷、出血量大、无法定量测定、试验动物敏捷逝世。

汤月霞等[9]、胡长途等[10]选用胶原酶消化血管外膜办法，发现胶原酶消化血管外膜30 min后，血管外膜变为白色，HE染色下发现外膜较消化前显着疏松，简单用器械钝性剥离。剥离至外膜白色疏松安排消失的程度，HE染色下发现外膜根本剥离洁净。

本试验选用胶原酶消化+眼科镊剥离血管外膜办法，使血管结构损坏，导致血管出血。考虑到试验的操作性、试验数据的量化，咱们选取了供血丰厚、分支较少、方位相对表浅易露出的兔颈动脉，在预试验过程中发现兔颈动脉较腹主动脉、股动脉等大动脉便于操作，露出充沛，对周围安排影响小，出血量可达满足作用。

1g/L浓度组试验侧60 s渗出量与阴性对照侧相差不大，经过HE染色发现，血管外膜仍残留部分结缔安排，外膜滋补血管未露出，提示1g/L浓度胶原酶消化血管外膜不完全，经眼科镊钝性剥离后，血管无显着出血。2 g/L胶原酶组试验侧60 s渗出量与阴性对照侧有显着差异，HE染色发现，血管外膜结缔安排剥离完全，外膜滋补血管广泛露出，内膜及中膜无损坏，提示2 g/L胶原酶消化外膜完全，经眼科镊钝性剥离后，外膜滋补血管广泛出血，出血量安稳，且有计算学含义。4 g/L浓度组60 s出血量已超越纱条吸附液体量，且血管决裂，试验动物敏捷逝世，提示4 g/L胶原酶消化外膜过度。

综上所述，2 g/L胶原酶消化+眼科镊钝性剥离血管外膜可导致外膜滋补血管广泛损坏，而血管中膜及内膜结构未损坏，出血量及出血速度安稳，试验操作可重复性及操作性好，因而能够成为一种点评部分止血药物作用的安稳、抱负的出血模型。

[参考文献]

[1] Vuceli D，Pesko P，Stojakov D，et al. Systemic hemostatic drugs[J]. Acta Chirurgica Iugoslavia，2007，54（1）：177-195.

Kunio等[3]、Rall等[4]选用单纯的外科手术锐性损害血管导致血管出血。该手术办法难度较大，因为器械直接损害血管全层，操作过程中易导致动脉瘤构成、血管直接决裂，呈现不行操控出血。国内牟华明等[5]也曾测验选用刀片刮除的办法去除血管外膜，因为刀片刮除外膜对血管牵张作用强，易刮伤血管壁构成机械损害、出血。在预试验的过程中，研讨发现器械直接锐性刮剥血管易导致血管决裂、出血敏捷、出血量大、无法定量测定、试验动物敏捷逝世。

汤月霞等[9]、胡长途等[10]选用胶原酶消化血管外膜办法，发现胶原酶消化血管外膜30 min后，血管外膜变为白色，HE染色下发现外膜较消化前显着疏松，简单用器械钝性剥离。剥离至外膜白色疏松安排消失的程度，HE染色下发现外膜根本剥离洁净。

本试验选用胶原酶消化+眼科镊剥离血管外膜办法，使血管结构损坏，导致血管出血。考虑到试验的操作性、试验数据的量化，咱们选取了供血丰厚、分支较少、方位相对表浅易露出的兔颈动脉，在预试验过程中发现兔颈动脉较腹主动脉、股动脉等大动脉便于操作，露出充沛，对周围安排影响小，出血量可达满足作用。

1g/L浓度组试验侧60 s渗出量与阴性对照侧相差不大，经过HE染色发现，血管外膜仍残留部分结缔安排，外膜滋补血管未露出，提示1g/L浓度胶原酶消化血管外膜不完全，经眼科镊钝性剥离后，血管无显着出血。2 g/L胶原酶组试验侧60 s渗出量与阴性对照侧有显着差异，HE染色发现，血管外膜结缔安排剥离完全，外膜滋补血管广泛露出，内膜及中膜无损坏，提示2 g/L胶原酶消化外膜完全，经眼科镊钝性剥离后，外膜滋补血管广泛出血，出血量安稳，且有计算学含义。4 g/L浓度组60 s出血量已超越纱条吸附液体量，且血管决裂，试验动物敏捷逝世，提示4 g/L胶原酶消化外膜过度。

综上所述，2 g/L胶原酶消化+眼科镊钝性剥离血管外膜可导致外膜滋补血管广泛损坏，而血管中膜及内膜结构未损坏，出血量及出血速度安稳，试验操作可重复性及操作性好，因而能够成为一种点评部分止血药物作用的安稳、抱负的出血模型。

[参考文献]

[1] Vuceli D，Pesko P，Stojakov D，et al. Systemic hemostatic drugs[J]. Acta Chirurgica Iugoslavia，2007，54（1）：177-195.