1、所有试剂和组分都先恢复到室温,阴阳性对照和样品,建议做复孔。
2、按前面试剂准备中描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。
3、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
4、设置阴阳性对照、样本孔和空白孔,阴阳性对照孔各加阴阳性对照50μL,样本孔加适当稀释后的待测样本50μL,空白孔不加,用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置20s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干。如此重复4次(共洗板5次)。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物前,要在干净不掉屑的纸上,充分拍干反应板。
6、除空白孔外,阴阳性对照孔和样本孔,加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。
7、用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱避光温育30min。
8、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置20s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干。如此重复4次(共洗板5次)。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物前,要在干净不掉屑的纸上,充分拍干反应板。
9、将底物A和B按1:1体积充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱避光温育15min。
10、所有孔加入终止液50μL,在450nm酶标仪上读取各孔吸光度(OD值)。
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