农业农村部公告 第608号

根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定，经审查，批准中国农业科学院哈尔滨兽医研究所等30家单位申报的布鲁氏菌抗体胶体金检测试纸条等7种兽药产品为新兽药，核发《新兽药注册证书》，发布产品工艺规程、质量标准、说明书和标签，并发布咪多卡残留检测方法标准（试行），自发布之日起执行。

批准天津市中升挑战生物科技有限公司等5家单位申报的戊二醛癸甲溴铵溶液等2种兽药产品变更注册，自发布之日起执行。

特此公告。

附件：

1.新兽药注册目录

2.兽药变更注册目录

3.工艺规程

4.质量标准

5.说明书和标签

6.咪多卡残留检测方法标准（试行）

农业农村部

2022年9月29日

附件1：

附件2：

附件3（略）

附件4（略）

附件5

说明书和标签

一、布鲁氏菌抗体胶体金检测试纸条说明书和内包装标签

（一）布鲁氏菌抗体胶体金检测试纸条说明书

兽用

【兽药名称】

通用名 布鲁氏菌抗体胶体金检测试纸条

商品名 无

英文名 Colloidal Gold Strips to Detect Brucella Antibody

汉语拼音 Bulushijun Kangti Jiaotijin Jianceshizhitiao

【主要成分与含量】

组分

规格

数量

布鲁氏菌抗体胶体金检测试纸条

1条/袋

25袋/盒

样品稀释液

7ml/瓶

1瓶/盒

【性状】 包装盒应无破损，无渗漏。其中：

试纸条 铝箔袋应封闭良好，表面光洁、无裂纹，内附干燥剂一包，样品滴管一支；试纸条塑料外壳应无破损、表面光洁，试纸条样品孔及视窗应清洁、无异物，装量为1条/袋，25袋/盒。

样品稀释液 无色澄清液体，装量为7ml/瓶，1瓶/盒。

【作用与用途】 用于检测牛、羊抗凝血和血清中光滑型布鲁氏菌抗体。

【用法与判定】

1用法

1.1试剂的准备 用前将试纸条、样品稀释液和待检样品均恢复至室温。

1.2取出试纸条 从包装铝箔袋中取出试纸条，样品孔（S）、测试区朝上平放于桌面上。

1.3加样 用样品滴管吸取血清或抗凝血，滴加1滴（约10μl）于样品孔（S）中，再滴加样品稀释液2滴（约100μl）于样品孔（S）中，加样后开始计时。

1.4观察 静置8～10分钟，仔细观察测试区窗口中检测线（T线）和质控线（C线）显色反应。

2判定

2.1在试纸条上出现两条紫红色条带（T线和C线），判为阳性（见示意图A）。

2.2在试纸条上仅出现一条紫红色条带（C线），判为阴性（见示意图B）。

2.3在试纸条上C线处不出现紫红色条带，判为无效（见示意图C和D）。

布鲁氏菌抗体胶体金检测试纸条检测结果判定示意图

【注意事项】

（1）试纸条应在2～30℃进行运输和贮存，严禁受潮。

（2）试纸条的包装袋如果有破损，请勿使用。包装袋打开后，应尽快使用。

（3）试纸条不能重复使用。

（4）样品稀释液应逐滴加入样品孔中，防止溢出。

（5）抗凝血样品不可冷冻；血清样品可冷藏或冷冻保存，忌反复冻融。

（6）溶血或腐败的样品勿用于检测。

（7）测试样品来自动物，可能有潜在感染性，应做好生物安全防护。

（8）试验完毕后，使用过的试纸条、样品和试剂应进行无害化处理。

【规格】 25袋/盒

【贮藏与有效期】 2～30℃保存，有效期为18个月。

【批准文号】

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

（二）布鲁氏菌抗体胶体金检测试纸条内包装标签

兽用

布鲁氏菌抗体胶体金检测试纸条

25袋/盒 批准文号：

批 号：

有效期至：

【用法与判定】 详见说明书。

【贮藏与有效期】 2～30℃保存，有效期为18个月。

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

兽用

布鲁氏菌抗体胶体金检测试纸条

1条/袋 批准文号：

批 号：

有效期至：

【用法与判定】 详见说明书。

【贮藏与有效期】 2～30℃保存，有效期为18个月。

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

兽用

样品稀释液

7ml/瓶

批 号：

有效期至：

【用法与判定】 详见说明书。

【贮藏与有效期】 2～30℃保存，有效期为18个月。

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

二、水貂阿留申病病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书和内包装标签

（一）水貂阿留申病病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书

兽用

【兽药名称】

通用名 水貂阿留申病病毒ELISA抗体检测试剂盒

商品名 无

英文名 Aleutian Mink Disease Virus ELISA Antibody Test Kit

汉语拼音 Shuidiaoaliushenbing Bingdu ELISA Kangtijiance Shijihe

【主要成分与含量】 试剂盒中含有如下成分：

【性状】试剂盒应无破损、无裂痕、无渗漏。其中：

（1）包被板 包装袋封闭良好，表面光洁、无裂纹，包被板孔底清洁、透明、无异物。1块/盒。

（2）阴性对照血清 无色或淡黄色澄清液体。1管/盒。

（3）阳性对照血清 无色或淡黄色澄清液体。1管/盒。

（4）样品稀释液 淡乳白色液体，久置有沉淀析出，摇匀后仍为淡乳白色液体。1瓶/盒。

（5）10倍浓缩洗涤液 无色或淡黄色澄清液体。1瓶/盒。

（6）酶标抗体 无色或淡黄色澄清液体。1瓶/盒。

（7）底物溶液 无色或淡蓝色澄清液体。1瓶/盒。

（8）终止液 无色澄清液体。1瓶/盒。

【作用与用途】用于检测水貂血清中水貂阿留申病病毒抗体。

【用法与判定】

1用法

1.1试剂的准备 用前将所有的试剂和待检血清恢复至15～25℃，试剂应轻轻地旋转或震荡予以混合。

1.2洗涤液的配制 取1份10倍浓缩洗涤液加入到9份双蒸水中，混匀。配制好的液体，应在3日内用完。

1.3待检血清的处理 用样品稀释液将待检血清样品按1∶200（v/v）进行稀释。

1.4操作步骤

1.4.1加样 根据样品数量，取可拆卸包被板，每孔加入稀释好的待检血清100μl，同时设阳性对照血清和阴性对照血清各2孔。

1.4.2孵育 将包被板密封后，置37℃孵育30分钟。

1.4.3洗涤 弃去孔中液体，每孔加入洗涤液300μl，弃去孔中液体，洗涤5次，每次拍干。

1.4.4加入酶标抗体 每孔加入酶标抗体100μl。

1.4.5孵育 将包被板密封后，置37℃孵育30分钟。

1.4.6洗涤 方法同1.4.3。

1.4.7显色 每孔加入底物溶液100μl，置15～25℃避光孵育10分钟。

1.4.8终止 每孔加入终止液100μl，轻微震荡混合均匀后，在波长为450nm下读取OD450nm值（应在加入终止液后5分钟内完成读数）。

1.4.9计算 按下式计算S/P值。

2试验成立的条件阳性对照血清OD450nm值均1.00≤OD450nm值≤1.70，阴性对照血清OD450nm值均＜0.20，则判为试验成立。

3判定待检血清S/P值≥0.23时，判为阳性；S/P值＜0.23时，判为阴性。

【注意事项】

（1）试剂盒应在2～8℃保存。

（2）贮藏时，所有的板条一定要用封口膜密封，防止潮气对包被板的损伤。

（3）不要使底物溶液接触强光和氧化物。取出后，不得再加回瓶中。

（4）仔细阅读说明书。

（5）不要使用过期的成分或者不同批次试剂混合使用。

（6）稀释10倍浓缩洗涤液时，如发现结晶，置37℃使其溶解后再使用。

（7）样品稀释液如有沉淀，应摇匀后再使用。

（8）注意加样和洗涤过程，应确保试验的准确度，严禁用嘴吸液。

（9）待检血清发生腐败时勿用于检测。

（10）检验用器皿必须清洁，操作过程避免与金属类器物接触。

（11）应严格按照试剂盒说明书进行操作，严格遵守各操作步骤规定的时间和温度。

（12）操作过程中使用手套，终止液是盐酸，具有腐蚀性，使用时要小心。所有废液和废物要进行无害化处理。

【规格】96孔/盒

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。

【批准文号】

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

（二）水貂阿留申病病毒ELISA抗体检测试剂盒内包装标签

兽用

水貂阿留申病病毒ELISA抗体检测试剂盒

96孔/盒 批准文号：

批 号：

有效期至：

【用法与判定】 详见说明书。

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

兽用

包被板

96孔/块 批 号：

有效期至：

【用法与判定】 详见说明书。

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

兽用

阴性对照血清

1ml/管 批 号：

有效期至：

【用法与判定】 详见说明书。

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

兽用

阳性对照血清

1ml/管 批 号：

有效期至：

【用法与判定】 详见说明书。

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

兽用

样品稀释液

30ml/瓶 批 号：

有效期至：

【用法与判定】 详见说明书。

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

兽用

10倍浓缩洗涤液

40ml/瓶 批 号：

有效期至：

【用法与判定】 详见说明书。

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

兽用

酶标抗体

10ml/瓶 批 号：

有效期至：

【用法与判定】 详见说明书。

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

兽用

底物溶液

10ml/瓶 批 号：

有效期至：

【用法与判定】 详见说明书。

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

兽用

终止液

10ml/瓶 批 号：

有效期至：

【用法与判定】 详见说明书。

【贮藏与有效期】 2～8℃保存，有效期为12个月。

【生产企业】

仅供兽医诊断使用

三、鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗（A型Q3株+B型Q26株+C型Q15株）说明书和内包装标签

（一）鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗（A型Q3株+B型Q26株+C型Q15株）说明书

兽用

【兽药名称】

通用名 鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗（A型Q3株+B型Q26株+C型Q15株）

商品名 无

英文名 Infectious Coryza Trivalent Vaccine，Inactivated（Serotype A，Strain Q3+ Serotype B，Strain Q26+ Serotype C，Strain Q15）

汉语拼音 Ji Chuanranxingbiyan Sanjia Miehuoyimiao（A xing Q3 Zhu+ B xing Q26 Zhu+ C xing Q15 Zhu）

【主要成分与含量】疫苗中含有灭活的副鸡禽杆菌A型Q3株、B型Q26株和C型Q15株，每毫升疫苗含副鸡禽杆菌A型Q3株菌数2×108 CFU、含副鸡禽杆菌B型Q26株菌数4×108 CFU、含副鸡禽杆菌C型Q15株菌数2×108 CFU。

【性状】乳白色均匀乳剂。

【作用与用途】用于预防由A型、B型、C型副鸡禽杆菌引起的鸡传染性鼻炎。5周龄以上鸡初次免疫，接种后28天产生免疫力，免疫期为6个月；5周龄以上鸡初次免疫，初免后3个月加强免疫一次，免疫期为12个月。

【用法与用量】颈背部皮下注射。5周龄以上鸡，每只0.5ml；建议初免后3个月加强免疫一次，每只0.5ml。

【不良反应】一般无可见的不良反应。

【注意事项】

（1）仅用于接种健康鸡。

（2）疫苗启封后，限当日用完。

（3）切忌冻结，冻结过的疫苗严禁使用。

（4）使用前，应将疫苗恢复至室温，并充分摇匀。

（5）注射器具应严格消毒，接种时应做局部消毒处理。

（6）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗应进行无害化处理。

【规格】

【包装】

【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期为18个月。

【批准文号】

【生产企业】

仅在兽医指导下使用

（二）鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗（A型Q3株+B型Q26株+C型Q15株）内包装标签

兽用

鸡传染性鼻炎三价灭活疫苗（A型Q3株+B型Q26株+C型Q15株）

批准文号：

批 号：

有效期至：

【作用与用途】用于预防由A型、B型、C型副鸡禽杆菌引起的鸡传染性鼻炎。5周龄以上鸡初次免疫，接种后28天产生免疫力，免疫期为6个月；5周龄以上鸡初次免疫，初免后3个月加强免疫一次，免疫期为12个月。

【用法与用量】颈背部皮下注射。5周龄以上鸡，每只0.5ml；建议初免后3个月加强免疫一次，每只0.5ml。

【贮藏与有效期】2～8℃保存，有效期为18个月。

【生产企业】

仅在兽医指导下使用

四、苦白石颗粒说明书和标签

（一）苦白石颗粒说明书

兽用

【兽药名称】

通用名称：苦白石颗粒

商品名称：

汉语拼音：Kubaishi Keli

【主要成分】苦参、白头翁、石榴皮、仙鹤草、肉桂、木香。

【性状】本品为浅黄棕色至红棕色的颗粒；气微，味甜、微苦。

【功能与主治】清热燥湿，涩肠止泻。主治仔猪湿热泄痢。

【用法与用量】灌服：每1kg体重，仔猪0.5g，连用5日。

【不良反应】按规定剂量使用，暂未发现不良反应。

【注意事项】暂无规定。

【规格】每1g相当于原生药1.4g。

【包装】 100g/袋。

【贮藏】密封，置凉暗处。

【有效期】 24个月。

【批准文号】

【生产企业】

（二）苦白石颗粒标签

兽用

【兽药名称】

通用名称：苦白石颗粒

商品名称：

汉语拼音：Kubaishi Keli

【主要成分】苦参、白头翁、石榴皮、仙鹤草、肉桂、木香。

【性状】本品为浅黄棕色至红棕色的颗粒；气微，味甜、微苦。

【功能与主治】清热燥湿，涩肠止泻。主治仔猪湿热泄痢。

【用法与用量】灌服：每1kg体重，仔猪0.5g，连用5日。

【规格】每1g相当于原生药1.4g。

【包装】 100g/袋。

【贮藏】密封，置凉暗处。

【生产日期】

【生产批号】

【有效期】至

【批准文号】

【生产企业】

五、头孢泊肟酯片说明书和标签

（一）头孢泊肟酯片说明书

宠物用

【兽药名称】

通用名称：头孢泊肟酯片

商品名称：

英文名称：Cefpodoxime Proxetil Tablets

汉语拼音：Toubaobowozhi Pian

【主要成分】头孢泊肟酯

【性状】本品为类白色片。

【药理作用】药效学 头孢泊肟酯为内服广谱第三代头孢菌素类抗生素，经胃肠道吸收后经酶解水解为头孢泊肟发挥抗菌作用，对革兰氏阳性菌和阴性菌均有效。本品的作用机理为抑制细胞壁的合成而达到杀菌作用。敏感菌主要有葡萄球菌、链球菌和革兰氏阴性菌（如巴氏杆菌、变形杆菌和埃希氏菌）。本品对大多数专性厌氧菌（如假单胞菌或肠球菌）无抗菌活性。

药动学头孢泊肟酯内服后经胃肠道吸收，在体内去酯化转变为具有活性的头孢泊肟进入血液循环。比格犬按10mg/kg体重剂量内服，头孢泊肟在体内的血药浓度达峰时间2.52±1.21小时、血药浓度峰值19.03±13μg/mL、消除半衰期10.46±4.69小时、消除率69.76±22.75mL/h/kg，相对生物利用度为97.49%。

药物相互作用在同抗酸药或H2受体拮抗剂合用时，可降低头孢泊肟的吸收和血药浓度。

【适应证】用于治疗犬由金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌、犬链球菌、大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌和奇异变形杆菌等引起的皮肤感染（创伤与脓肿）。

【用法与用量】以头孢泊肟计。口服：每1kg体重，犬5～10mg。每日1次，连用5～7日，或连用至临床症状消失后2～3日，最长可连用28日。

【不良反应】偶见呕吐、腹泻、多饮和食欲下降的症状。

【注意事项】

1.禁用于已知对头孢泊肟或β–内酰胺类（青霉素类和头孢菌素类）抗生素过敏的犬。

2.抗菌药，包括青霉素类和头孢菌素类，可导致敏感个体发生过敏反应。为将过敏反应可能性降至最低，处理本品时，避免皮肤和粘膜直接与本品接触。

3.头孢泊肟酯在育种犬、妊娠犬或哺乳母犬中的安全性尚未得到证实。

4.与其它头孢菌素类药物相同，头孢泊肟酯偶见直接Coombs试验阳性。

5.请置于儿童无法触及处。

6.治疗急性感染时，如果连用3～4日未见治疗效果，则不应继续使用本药。

7.应根据患病犬皮肤感染的严重程度和性质、致病微生物的易感性和患病犬宿主防御机制的完整性等因素确定给药剂量。

8.给药前后无需禁食。

【休药期】不需要制定。

【规格】以C15H17N5O6S2计100mg

【包装】

【贮藏】密封，在阴凉干燥处保存。

【有效期】24个月

【生产企业】

（二）头孢泊肟酯片标签

宠物用

【兽药名称】

通用名称：头孢泊肟酯片

商品名称：

英文名称：Cefpodoxime proxetil Tablets

汉语拼音：Toubaobowozhi Pian

【主要成分】头孢泊肟酯

【性状】本品为类白色片。

【适应证】用于治疗犬由金黄色葡萄球菌、中间型葡萄球菌、犬链球菌、大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌和奇异变形杆菌等引起的皮肤感染（创伤与脓肿）。

【用法与用量】以头孢泊肟计。口服：每1kg体重，犬5～10mg。每日1次，连用5～7日，或连用至临床症状消失后2～3日，最长可连用28日。

【规格】按C15H17N5O6S2计100mg

【批准文号】

【生产日期】

【生产批号】

【有效期】 至

【休药期】不需要制定。

【贮藏】密封，在阴凉干燥处保存。

【包装】

【生产企业】

六、二丙酸咪多卡标签

二丙酸咪多卡标签

兽用

【兽药名称】

通用名称：二丙酸咪多卡

英文名称：Imidocarb Dipropionate

汉语拼音：Er’bingsuan Miduoka

【包装规格】

【生产日期】

【生产批号】

【有效期】至

【运输注意事项】轻搬轻放、切勿挤压。

【贮藏】密封，置干燥处保存。

【批准文号】

【生产企业】

七、二丙酸咪多卡注射液说明书和标签

（一）二丙酸咪多卡注射液说明书

兽用

【兽药名称】

通用名称：二丙酸咪多卡注射液

商品名称：

英文名称：Imidocarb Dipropionate Injection

汉语拼音：Er’bingsuan Miduoka Zhusheye

【主要成分】二丙酸咪多卡

【性状】本品为几乎无色至淡黄色的澄明液体；有特臭。

【药理作用】药效学 咪多卡可直接作用于寄生虫，引起核酸在数量和大小上发生变化以及细胞形态学上发生改变。抗原虫活性来源于碳酰替对寄生虫的糖酵解发挥作用，引起宿主血糖降低，能选择性抑制寄生虫DNA的复制。

药动学牛皮下注射咪多卡后，吸收迅速，分布广泛，消除缓慢，半衰期较长。

【适应证】用于治疗和预防肉牛巴贝斯虫病。

【用法与用量】以咪多卡计，皮下注射：治疗用量为每1kg体重，肉牛0.85mg（相当于每100kg体重，肉牛1ml）；预防用量为每1kg体重，肉牛2.125mg（相当于每100kg体重，肉牛2.5ml）。

【不良反应】给药后动物可能表现出类胆碱的症状。盐酸阿托品治疗可能会缓解副作用。

【注意事项】

（1）不得用于静脉注射或肌内注射，每个注射位点注射体积不多于10ml；不得重复给药和过量给药。

（2）本品不得冷冻贮存，首次开启后28日内使用。

（3）若无兽医师指导，严禁与抗胆碱活性药物一同使用。

（4）使用该产品需佩戴防渗透手套，皮肤或眼睛接触本品，需立即用水清洗。

（5）本品仅用于肉牛。

【休药期】牛224日。

【规格】按C19H20N6O计算 100ml︰8.5g

【包装】

【贮藏】遮光，密闭，在25℃以下保存。

【有效期】18个月。开启后28日。

【批准文号】

【生产企业】

（二）二丙酸咪多卡注射液标签

兽用

【兽药名称】

通用名称：二丙酸咪多卡注射液

商品名称：

英文名称：Imidocarb Dipropionate Injection

汉语拼音：Er’bingsuan Miduoka Zhusheye

【主要成分】二丙酸咪多卡

【性状】本品为几乎无色至淡黄色的澄明液体；有特臭。

【适应证】用于治疗和预防肉牛巴贝斯虫病。

【用法与用量】以咪多卡计，皮下注射：治疗用量为每1kg体重，肉牛0.85mg（相当于每100kg体重，肉牛1ml）；预防用量为每1kg体重，肉牛2.125mg（相当于每100kg体重，肉牛2.5ml）。

【规格】按C19H20N6O计算 100ml︰8.5g

【批准文号】

【生产日期】

【生产批号】

【有效期】至

【休药期】牛224日。

【包装】

【贮藏】遮光，密闭，在25℃以下保存。

【生产企业】

附件6

咪多卡残留检测方法标准（试行）

牛可食性组织中咪多卡残留量的测定

液相色谱–串联质谱法

1范围

本标准规定了牛可食性组织中咪多卡药物残留量检测的制样和液相色谱–串联质谱测定方法。

本标准适用于牛肌肉、肝脏、肾脏及脂肪中咪多卡药物残留量的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本

适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

试料（肌肉、肝脏、肾脏）中残留的咪多卡经蛋白酶酶解，PBS缓冲溶液提取，固相萃取柱净化，液相色谱–串联质谱法测定，基质匹配标准溶液外标法定量。

试料（脂肪）中残留的咪多卡经0.2%EDTA溶液提取，固相萃取柱净化，液相色谱–串联质谱法测定，基质匹配标准溶液外标法定量。

4试剂和材料

4.1试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T 6682规定的一级水。

4.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

4.1.2甲醇（CH4O）：色谱纯。

4.1.3氨水（NH3·H2O）。

4.1.4甲酸（CH2O2）：色谱纯。

4.1.5三氟乙酸（CF3COOH）。

4.1.6磷酸二氢钠（NaH2PO4）。

4.1.7磷酸氢二钠（Na2HPO4）。

4.1.8乙二胺四乙酸二钠（EDTA–2Na）。

4.1.9枯草杆菌蛋白酶。

4.2溶液配制

4.2.1PBS缓冲溶液（pH值=7.8）：甲液取35.9g磷酸氢二钠，用水溶解并稀释至500mL；乙液取磷酸二氢钠2.76g，用水溶解并稀释至100mL，取91.5mL甲液与8.5mL乙液混合。

4.2.20.2%EDTA溶液：称取乙二胺四乙酸二钠2g，溶于100mL水中，加入乙腈100mL混匀，用甲醇稀释至1000mL。

4.2.30.1%甲酸溶液：取1mL甲酸，用水稀释至1000mL。现配现用。

4.2.40.1M盐酸溶液：取12M浓盐酸8.3mL用水稀释至1000mL。

4.2.550%甲醇溶液：取50mL甲醇，用水稀释至100mL。

4.2.6淋洗液：取氨水5mL，用50%甲醇溶液稀释至100mL。

4.2.7洗脱液：取甲酸4mL，用甲醇稀释至100mL。

4.2.815%甲醇溶液：取甲醇15mL，用水稀释至100mL。

4.2.9标准稀释液：取0.1M盐酸20mL，用甲醇稀释至100mL。

4.3标准品

二丙酸咪多卡（Imidocarb Dipropionate，分子式C19H20N6O，CAS：55750–06–6），含量≥98.5%。

1.4标准溶液的制备

4.4.1标准储备液：取咪多卡标准品约10mg，精密称定，于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1.0mg/mL的咪多卡标准储备液。-18℃以下保存，有效期6个月。

4.4.2标准工作液：精密量取咪多卡标准储备液0.1mL，于10mL容量瓶中，用标准稀释液稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL的标准工作液。2～8℃保存，有效期3个月。

4.5材料

4.5.1WCX固相萃取柱：3cc/60mg，或相当者。

4.5.2微孔滤膜：0.22μm。

5仪器和设备

5.1液相色谱–串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。

5.2分析天平：感量0.00001g

5.3天平：感量0.01g。

5.4涡旋混合器。

5.5高速离心机。

5.6固相萃取装置。

5.7氮吹仪。

5.8恒温水平振荡仪。

6试料的制备与保存

6.1试料的制备

取适量新鲜或解冻的空白或供试样品，匀质。

¾¾取匀质后的供试样品，作为供试试料。

¾¾取匀质后的空白样品，作为空白试料。

¾¾取匀质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料。

6.2试料的保存

-20℃以下保存。

7测定步骤

7.1 提取

7.1.1牛肌肉、肝脏、肾脏

称取试料1（±0.01）g，置于50mL离心管内，加入PBS缓冲溶液1ml涡旋1min，加入300μL枯草杆菌蛋白酶，涡旋2min，于37℃水平振荡6h。加入PBS溶液2ml，涡旋1min，超声15min，18000r/min离心10min，残渣重提两次，合并两次提取液备用。

7.1.2牛脂肪

称取试料1（±0.01）g，置于50mL离心管中，加入0.2%EDTA溶液3ml，涡旋2min，于37℃水平振荡3h，15000r/min离心10min，残渣重提两次，合并两次提取液备用。

7.2 净化与浓缩

WCX固相萃取柱依次用3mL甲醇、3mL水活化，将全部备用液过柱，用3mL淋洗液淋洗，用3mL（脂肪用6mL）洗脱液洗脱，然后挤干，收集洗脱液于10mL玻璃试管中，挤干，于40℃氮气吹干，残余物用15%甲醇1.0mL溶解后，过0.22µm微孔滤膜后上机测定。

7.3 基质匹配标准曲线的制备

在空白试料（肝脏、肾脏、肌肉组织）经提取、净化、氮气吹干后的残余物中，依次加入用15%甲醇溶液配制的系列咪多卡标准工作液，配制成浓度为1、5、10、20、25、50ng/mL系列基质匹配标准溶液；在空白试料（脂肪组织）经提取、净化、氮气吹干后的残余物中，依次加入用15%甲醇溶液配制的系列咪多卡标准工作液，配制成浓度为1、10、25、50、75、100ng/mL系列基质匹配标准溶液。充分溶解，过滤膜后上机测定。以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，基质匹配标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。

7.4测定

7.4.1液相色谱参考条件

a）色谱柱：ACQUITY UPLCR BEH Phenyl（50mm×2.1mm，1.7µm），或性能相当者；

b）流动相：A相为甲醇，B相为0.1%甲酸溶液。梯度洗脱程序：0～1.5min，保持15%A，1.5～3min线性变化至90%A；3～5min线性变化至15%A，5～6min保持15%A。

c）流速：0.35mL/min；

d）进样量：2μL；

e）柱温：40℃。

7.4.2串联质谱参考条件

a）离子源：电喷雾离子源；

b）扫描方式：正离子扫描；

c）检测方式：多反应离子监测（MRM）；

d）去溶剂气流量：850L/hr；

e）电喷雾毛细管电压（IS）：2.43kV；

f）锥孔反吹气流量：150L/hr；

g）二级碰撞气：Ar2；

h）雾化温度：500℃；

咪多卡定性、定量离子对和对应的锥孔电压、碰撞能量参考值见表2。

表2 咪多卡定性、定量离子对和对应的锥孔电压、碰撞能量

药物

定性离子对

(m/z)

定量离子对

(m/z)

锥孔电压

(V)

碰撞能量

(eV)

咪多卡

175＞161.96

175＞161.96

30

16

175＞187.98

16

7.4.3 测定法

试样溶液的保留时间在基质匹配标准溶液保留时间的±2.5%之内。试样溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比，符合表3的要求。

取基质匹配标准溶液和试样溶液，作单点或多点校准，按外标法，以峰面积计算。基质匹配标准溶液及试样溶液中咪多卡的峰面积应在仪器检测的线性范围之内，超出线性范围时应进行适当倍数稀释后再进行分析。牛空白肝脏溶液、牛空白肝脏基质匹配标准溶液和牛空白肝脏添加试样溶液中特征离子质量色谱图见附录A中图A.1～图A.3。

表3 试样溶液中离子相对丰度的允许偏差范围

相对丰度（%）

允许偏差（%）

＞50

±20

20～50

±25

10～20

±30

≤10

±50

7.5空白试验

取空白试料，除不加药物外，采用完全相同的测定步骤进行测定。

8结果计算和表述

试料中咪多卡的残留量按标准曲线或式（1）计算：

式中：

X—供试试料中咪多卡残留量，单位为微克每千克（µg/kg）；

C—基质匹配标准溶液中咪多卡浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

A—试样溶液中咪多卡的峰面积；

As—基质匹配标准溶液中咪多卡的峰面积；

V—溶解残余物所用溶液体积，单位为毫升（mL）；

m—供试试料质量，单位为克（g）。

注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。

9检测方法的灵敏度、准确度和精密度

9.1 灵敏度

咪多卡在牛肌肉、脂肪、肝脏和肾脏中的检测限为0.5μg/kg，定量限为1.0μg/kg。

9.2 准确度

本方法对于牛肌肉样品在150µg/kg～600µg/kg、牛脂肪样品在25µg/kg～100µg/kg、牛肝脏样品750µg/kg～3000µg/kg以及肾脏样品1000µg/kg～4000µg/kg添加浓度上的回收率为60%～110%。

9.3 精密度

本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15%。

附录A

（资料性附录）

咪多卡特征离子质量色谱图

图A.1 牛空白肝脏溶液中咪多卡特征离子质量色谱图

图A.2 牛空白肝脏基质匹配标准溶液（10ng/g）咪多卡特征离子质量色谱图

图A.3 牛空白肝脏添加咪多卡（10ng/g）特征离子质量的色谱图

来源：农业农村部