新城疫病毒(NDV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)适用于检测病禽肺脏、心等组织、体液或淋巴结等标本以及细胞培养液中禽病毒(AIBV)RNA,适用于禽病毒(AIBV)感染的辅助诊断及流行病学调查,其检测结果仅供参考。

新城疫（Infection with Newcastledisease virus，newcastle disease,ND），在中国属二类动物疫病病。OIE将其列为A类疫病。新城疫是由新城疫病毒引起禽的一种急性、热性、败血性和高度接触性传染病。以高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的一种主要传染病。

新城疫病毒为副黏病毒科新城疫样病毒属（Avulavirus）的禽副黏病毒I型（APMV-1）。病毒存在于病禽的所有组织器官、体液、分泌物和排泄中，以脑、脾、肺含毒量最高，以骨髓含毒时间最长。在低温条件下抵抗力强，在4℃可存活12年，-20℃时能存活10年以上；真空冻干病毒在30℃可保存30天，15℃可保存230天；不同毒株对热的稳定性有较大的差异。

该病毒对消毒剂、日光及高温抵抗力不强，一般消毒剂的常用浓度即可很快将其杀灭，很多种因素都能影响消毒剂的效果，如病毒的数量、毒株的种类、温度、湿度、阳光照射、贮存条件及是否存在有机物等，尤其是以有机物的存在和低温的影响作用最大。

新城疫病毒(NDV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)

适用仪器：ABI 7300、7500、ABI stepone/stepone plus、安捷伦MX3000P/3005P、MJ Opticon2等其他荧光定量PCR检测仪。

阳性：检测通道Ct值≤35.0，且曲线有明显的指数增长曲线；

可疑：检测通道35.0＜Ct值≤37，建议重复检测，如果检测通道仍为35.0<Ct值≤37，且曲线有明显的增长曲线，判定为阳性，否则为阴性；

阴性：样本检测结果Ct值>37或无Ct值。

阴性质控品：无明显扩增曲线或无Ct值显示；

阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值≤32；

以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

1.样品处理（样本处理区）

1.1样本前处理

1.2 RNA提取

2.试剂配制（试剂准备区）

3.加样（样本处理区）

4.PCR扩增（核酸扩增区）

5.结果分析判定

研究目标是开发一种环保、高效的新型疫苗候选株,旨在实现对NDV和FAdV的有效防控。

主要研究如下:一、ND-FAd-4/8a/8b cVLPs的构建与鉴定对FAdV-8a/8b Fiber基因序列进行密码子优化,通过胞外域替换策略将NDV HN基因的胞外域替换成FAdV-8a/8b Fiber基因胞外域,经新城疫病毒(NDV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)与测序鉴定正确后命名为c8a/8b Fiber基因。利用昆虫杆状病毒表达系统拯救含有c8a Fiber、c8b Fiber基因的重组杆状病毒rBV-c8a Fiber、rBV-c8b Fiber并利用新城疫病毒(NDV)核酸试剂盒(荧光-PCR法)、western blot及免疫荧光进行鉴定。

特异性PCR结果显示rBV-c8a Fiber的条带为1,758 bp、rBV-c8b Fiber的条带为1,752 bp,M13通用PCR结果显示rBV-c8a Fiber的条带为4,258 bp、rBV-c8b Fiber的条带为4,252 bp。Western blot结果显示c8a Fiber蛋白约62 kDa、c8b Fiber蛋白约62 kDa。免疫荧光结果显示rBV-c8a Fiber和rBVc8b Fiber感染组sf9细胞呈现显著的绿色荧光。将rBV-c8a Fiber、rBV-c8b Fiber和实验室保存的rBV-NDV M、rBV-NDV HN、rBV-c Fiber2共转染至悬浮sf9细胞制备ND-FAd-4/8a/8b cVLPs,经超速离心和蔗糖密度梯度离心纯化后对其进行鉴定,western blot结果显示ND-FAd-4/8a/8b cVLPs各组分蛋白均正确表达,透射电镜观察到ND-FAd-4/8a/8b cVLPs空间构建与野生NDV相似且为纳米级颗粒,表明ND-FAd-4/8a/8b cVLPs被正确组装。

参考文献

[1]Genetic evolution of Newcastle Disease Virus sub-genotype VII.2 isolates,diagnosed from vaccinated poultry farms of Gujarat,India.[J].Sandipkumar S Patel;Harshadkumar C Chauhan;Kishan Kumar Sharma;Arunkumar C Patel;Namdeo R Bulbule;Samir H Raval;Mehul D Shrimali;Sushil Kumar Mohapatra;Harshkumar A Patel.Gene.2024

[2]The Application of Newcastle Disease Virus(NDV):Vaccine Vectors and Tumor Therapy[J].Huiming Yang;Jiaxin Tian;Jing Zhao;Ye Zhao;Guozhong Zhang.Viruses.2024

[3]Vaccine adjuvants:current status,research and development,licensing,and future opportunities.[J].Ying Cui;Megan Ho;Yongjie Hu;Yuan Shi.Journal of materials chemistry.B.2024

[4]Protective effects of a novel chimeric virus-like particle vaccine against virulent NDV and IBDV challenge.[J].Li Jindou;Ding Jiaxin;Chen Kainan;Xu Xiaohong;Shao Yanan;Zhang Di;Yu Xibing;Guo Chunhong;Qian Jing;Ding Zhuang.Vaccine.2024

[5]郭春红.新城疫及禽腺病毒病嵌合病毒样颗粒的制备及免疫保护效果评价[D].吉林大学,2024.