ECM的制备采用了之前描述的改进方案11,25, 26。猪关节软骨样本经过10次冻融循环(-80°C至室温),然后进行机械粉碎。将匀浆组织在trypsin-EDTA中孵育24小时。组织用PBS(pH 7.4)冲洗后,使用核酸酶溶液(50 U/mL DNase I,1 U/mL RNase A)在37°C下进行3小时的酶法去细胞化处理。
我们采用改进的方法制备了ECM。通过组织学染色(Safranin O、甲苯胺蓝和II型胶原IHC染色)和生化表征,在去细胞化前后分析了软骨的组成。这些分析表明,天然软骨组织富含胶原和糖胺聚糖(GAGs)(Figure S1A,支持信息)。DAPI染色(Figure S1B,支持信息)证实了去细胞化的成功。
先前的研究已经证实关节腔内存在大量的MSCs,包括来自滑膜、滑液、髌下脂肪垫和骨髓的MSCs28,29。在关节软骨损伤后,这些MSCs可以在特定的生化信号作用下被激活并招募到损伤部位,参与内源性修复过程11,30。然而,由于缺乏再生微环境和持续的趋化信号,这种内在的修复能力受到限制
在这项研究中,我们开发了一种基于生物活性细胞外基质的支架,该支架采用低温沉积打印技术制备,并用趋化肽PFS进行功能化处理。该支架结合了ECM来源的信号和靶向内源性干细胞的招募,从而实现了无细胞方式的软骨再生。这些发现表明,具有趋化信号功能的ECM支架是内源性软骨修复的一种有前景的方法。
陈明雪:撰写原始稿件、概念构思、资金获取。
吴江:撰写原始稿件、概念构思。
王浩:数据管理。
杨永康:实验研究、软件使用、资料收集。
隋翔:方法学设计。
傅立伟:撰写、审稿与编辑、实验研究。
郭全义:撰写、审稿与编辑、资金获取。
陈明雪:撰写 – 审稿与编辑、撰写原始稿件、资源获取、概念构思。
吴江:撰写原始稿件、方法学设计、实验研究、数据分析、概念构思。
王浩:方法学设计、数据管理、概念构思。
杨永康:软件使用、方法学设计、实验研究。
隋翔:项目监督、项目管理、实验研究。
傅立伟:撰写 – 审稿与编辑、撰写原始稿件、验证、项目监督。
郭全义: