比起全自动生化分析仪,半自动生化分析仪操作更繁琐。但有人会好奇,为什么不用读板机(酶标仪俗称)做生化检查?
验证过程
1. 酶标仪原理
酶标仪就是一台光电比色计或分光光度计,采用朗伯-比尔定律,单色光从塑料微孔的上方照射,通过小孔中的试剂与标本反应的有色溶液,一部分光被吸收,透过该溶液的另一部分光经微孔下方的接收器转换为电信号,显示于外接电脑。
2. 器材与试剂:酶标仪、(未包被)空白塑料微孔板、加样枪;血糖试剂(终点法,手工或半自动生化分析仪)。
3. 「线性血清」:选取该生化项目终点法线性范围内的 6 个不同浓度血清(用标准品最好),随标本一起检测。这样,我们就可以根据 6 个不同浓度血清对应的吸光度,根据线性回归关系得到一个计算公式:浓度 = 系数乘吸光度(C = bA,)。与我们上一篇文章中提到的方法很类似,大家可以参考。
4. 试剂空白对照孔:设置一个试剂空白对照孔,扣除试剂本身对吸光度的影响。
5. 试剂与标本加入量比例调试,二者混合后的反应溶液总量不能超过微孔容量,例如某酶标仪要求不超过 250 微升。该比例需保证不出现试剂耗尽等等情况,即保证其反应在最适范围内。先加标本,再加入试剂(用排枪更好),减少微孔之间的反应时间误差。
6. 微孔分配:常见的微孔板有 8*12 个孔,一板最多可以做 96 份标本;一般设一个试剂空白对照孔、6 个「线性血清」孔和 89 个标本孔。
7. 温浴:温度与时间按照试剂说明书要求。
8. 读板:读取各孔的 OD 值(就是吸光度),扣除试剂空白,求取浓度与吸光度的线性公式,将标本孔吸光度代入线性公式中,最后得到标本浓度。(EXCEL 表批量处理很简单)
分析总结
1. 半自动生化分析仪的优缺点
随着检验技术的发展,在县级以上医院或经济条件较好的县级以下医疗单位,基本实现了全自动生化分析,半自动生化分析仪有被完全淘汰的趋势。
但是,半自动生化分析仪因为仪器、试剂、消耗的低成本,在目前许多小的医疗单位还有一定的生存空间,而且半自动生化分析仪比手工生化操作(紫外分光光度计法)操作相对简便、快速等等。
相对于酶标仪,半自动生化分析仪也有其不足之处,容易出现交叉污染、结果不稳定、需要的试剂量比较大等等。
2. 酶标仪做生化的优点与不足
与半自动生化分析仪相比,酶标仪做生化项目的优点:可以同时检测 96 个样本,大大提高了检测速度,节省了工作时间和空间;损耗试剂量少,节省了成本;标本检测时的重复性、稳定性好;同批次操作自带「线性」参考,扣除了试剂空白,结果更精准;不需要液路冲洗,也避免了交叉污染。
不足:只在血糖终点法进行了验证,对于其是否也可以应用于其它方法,尚需实验探讨,目前,有血站关于做 ALT 的研究报道。半自动生化分析仪有多个波长可供选择,而酶标仪仅有两个波长,有研究指出,出现最大吸收峰的波长为实验的推荐波长;然而,并非其它波长不可使用,只是对不同浓度标本的吸光度的区分度有所下降而已。
3. 酶标仪应用前景
在检验工作中,酶标仪经常应用于免疫室定性实验微孔板的检测,是对酶联免疫检测实验结果进行读取和分析的专业仪器。在临床检验、生物学研究、农业科学、食品和环境科学中,特别是随着多种酶联免疫检测试剂盒的研发,酶标仪得到了广泛的应用;在医学检验的乙肝五项、艾滋病检测、丙肝检测、优生五项、激素检测等等方面,酶标仪均有涉猎。
酶标仪所做的生化项目,均需要实验验证方可,实验数据是检验的喉舌。对于小的医疗单位,可以在接收社区大批量体检时应用。