1 Purpose目的

规范液基细胞学血性标本制片行为，保证涂片质量满足诊断要求。

2 Scopes适用范围

液基细胞学血性标本制片的操作。

3 Definitions定义

不涉及

4. Responsibility职责

病理技术员：负责所有仪器及标本的处理。

5 Process工作流程

5.1将血性标本的申请单和标本一起转入细胞制片室。

5.2 准备工作：实验室人员进入实验室制片前穿好工作服，带口罩、手套。

5.3 每例标本检查前需核对一般信息：条型码、细胞学号及标本不合格原因并记录。

5.4 将血性标本的剩余标本全部倒入专用试管内，根据标本病理号对试管进行编号，并一一对应，加平衡液配平。

5.5 标本振荡均匀（WH-861  旋涡混合器）。

5.6 放入离心机离心3分钟（1000转/分）；弃上清液留沉淀。

离心机名称（型号）	离心时间	离心转速
TDZ 5-WS	3分钟	1000转/分

5.7 加至10ml 40%冰醋酸震荡均匀，静置20分钟。

5.8 再次离心3分钟（1000转/分）；弃上清液留沉淀。

5.9 加至10ml平衡液，震荡均匀。

5.10 将玻片上的编号向上，插入专用底座内，放好直筒漏斗，用配套的固定环卡紧玻片后，

摆放检验台上备用。

5.11 制片加样：将振荡后标本按申请单顺序与玻片套组一一对应，放置检验台，并在玻片上标记该标本病理号（与试管上号码对应），再按照密度仪显示细胞浓度的大小加入适量的标本量。用平衡液配平标本，配平原则按照离心机的对应平衡原则，如为六转子，则两两或三三配平。（注意：平衡液应用加样枪不碰触筒壁缓慢吸加数次与标本液混匀）。切记，在加样前确定玻片编号与试管上的病理号一致。

加样标准:

细胞构成等级	细胞数量（微量移液器取样量）	描述
A	5ml	极低的标本数量
A/2	2.5ml	较低的标本数量
B+	1.2ml	小量的细胞组成
B	700µl	中等的细胞组成
B/2	350µl	较好的细胞标本
C	200µl	大量的细胞标本
C/2	100µl	非常大量的细胞标本

5.12 离心制片：接通离心制片机电源，打开开关后，抬起机盖，将配平后标本放入离心机内吊篮盒中，掌握对应平衡原则，使相对应的转子离心力相等。盖紧机盖，设置离心时间，速度2000转/分，按“start”键开始离心。

离心机名称（型号）	离心时间	离心转速
ROTOFIX32	5分钟	2000转/分
CYTOPREP-1	4分钟	2000转/分
TCTWerp-1	7分钟	2000转/分

5.13 固定：将离心后标本玻片套组取出，弃上清液，倒置在毛巾垫上控干液体，打开固定环，取出直筒漏斗，缓慢取出玻片，放置在玻片板上，待细胞潮干后，放入95%酒精缸内固定。

5.14 染色（参考文件《细胞学涂片巴氏染色标准操作程序》），并参考文件《细胞染色质量控制标准操作程序》调整染色时间。

5.14.1 固定好的涂片浸入水中清洗30秒。

5.14.2 细胞玻片浸入苏木素染液缸中2分钟。

5.14.3 细胞玻片入水，洗去多余的苏木素。

5.14.4 细胞玻片入1%盐酸酒精分化液中约3秒至细胞玻片由紫色变为紫红色。

5.14.5 再入流水中冲洗2分钟，使细胞玻片由紫红色变为蓝色（注意：流水不能直接冲击细胞玻片防止脱片）。

5.14.6 细胞玻片浸入橙黄染色缸约15秒。

5.14.7 依次浸入盛有95%乙醇Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号缸各10秒，以洗掉多余橙黄。

5.14.8 细胞玻片浸入EA50染缸2分钟。

5.14.9 依次浸入盛有95%乙醇Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号缸各10秒，以洗掉多余EA。

5.14.10 依次浸入盛有100%乙醇Ⅰ、Ⅱ号缸时间分别为20、60秒，脱水。

5.14.11 填写《巴氏染色过程质量控制记录表》

5.15 封片

5.15.1 中性树胶滴至涂片上用24*32mm盖玻片封固（注意：应无溢胶、无气泡，盖玻片下充满中性树胶）。

5.15.2 对应载玻片上号码贴标签(注意：位置正确，边缘不遮盖盖玻片)。

5.16 将不合格标本申请单与处理后的标本玻片一同送往待阅处。

5.17 标本保存：标本自报告发出后保存2周

5.18 注意事项

5.18.1 加样枪加样时应注意避开大量黏液。

5.18.2 加样时应防止吸力过度标本液接触枪头顶部污染枪口。

5.18.3 载玻片要放置到位。

6 References相关文件

6.1 SOP-CYTOP010-G《细胞染色质量控制标准操作程序》

6.2 SOP-CYTOP010(A)-G《细胞学涂片巴氏染色标准操作程序》

7 Records相关记录

7.1 SOP-CYTOP010-01-G《巴氏染色过程质量控制记录表》