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病理学技术（组织标本切片和染色技术）是组织学、病理学等学科用于观察和研究组织与细胞的正常形态及病理变化的常用方法。组织经过固定、切片和染色后，在显微镜下能清晰观察其组织结构。

今天，带领大家了解一下病理实验全流程的详细步骤吧~快快🐎住！

取材

01

1.组织选择：在进行取材时，选择代表性强的组织区域至关重要。这一选择依赖于对病变部位的精确判断，确保所取样本能够反映病理状态或研究需求。

2.组织处理：取材后，组织需立即用适当的固定剂（通常是福尔马林）固定。固定时间依赖于组织的大小和密度，一般推荐24~48小时，以确保组织的结构和分子完整性。

包埋

02

1.脱水：固定后的组织首先需经过一系列浓度递增的酒精溶液脱水，以去除组织中的水分。

2.透明：随后使用如二甲苯等透明剂，使组织透明化，为浸蜡做准备。

3.浸蜡：完全脱水和透明化后，组织被浸入熔融的石蜡中，石蜡在冷却后形成坚固的包埋块，使组织固定在所需的方向，便于后续的切片制作。

切片

03

1.技术要点

• 切片厚度选择：从包埋块中切取薄片时，通常选择4~5微米厚度，这一厚度最适合大多数染色技术，确保细胞结构的清晰可见而不会产生重叠影响。
• 微切片技术：使用显微切片机平稳操作，保证切片的均匀和连续。

2.切片处理

• 烘干：将切片放置在滑片上，通常在37℃下烘干数小时，有时过夜，以固定组织在滑片上。

• 脱蜡：为了去除石蜡并使组织准备好染色，切片需要在二甲苯中处理，随后用系列浓度的酒精进行水化处理。

染色（以HE染色为例）

04

1.试剂配制

• 固定液：10%甲醛溶液；
• 苏木精染液：称取苏木精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，然后取31g的NaIO，5ml水，再加入30ml甘油和2ml冰醋酸，混合均匀，滤纸过滤，备用；
• 伊红染液：称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中；
• 稀盐酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1%盐酸；
• 系列浓度的乙醇、二甲苯、中性树胶。

2.实验步骤

①石蜡切片脱蜡至水

依次将切片放入二甲苯Ⅰ10min-->二甲苯Ⅱ10min-->无水乙醇Ⅰ5min-->无水乙醇Ⅱ5min-->95%酒精5min-->95%酒精5min-->80%酒精5min-->自来水冲洗。

②苏木素染细胞核

切片放入苏木素染3-8min，自来水冲洗，接着用1%的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，最后用0.6%氨水返蓝，流水冲洗。

③伊红染细胞质

切片入伊红染液中染色1-3min。

④脱水封片

将切片依次放入95%酒精Ⅰ5min-->95%酒精Ⅱ5min-->无水乙醇Ⅰ5min-->无水乙醇Ⅱ5min-->二甲苯Ⅰ5min-->二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。

⑤显微镜镜检，图像采集分析

细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色，细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色，胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。

3.常见染色方法

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4.各类组织常见染色方法及指标

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每种染色方法都有其优点和限制，需要根据具体需求选择合适的方法，并注意控制实验条件以获得可靠的结果。

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